Факультет

Студентам

Посетителям

Выращивание пшеницы

Окраска пыльцы кукурузы для подсчета фертильных и стерильных пыльцевых зерен (Kowles, 1971)

1 г агара растворяют в 50 мл дистиллированной воды и кипятят 3 мин. К раствору добавляют 6 мл иода в иодистом калии (0.3 г 12 и 1 г KI в 100 мл воды), затем 14 мл 1 н. соляной кислоты. Раствор следует хорошо перемешать. Горячий раствор переливают в небольшую колбу, из которой его удобно брать стеклянной палочкой. Перед приготовлением препарата раствор разогревают на водяной бане.

Выявление каллозы микроспороцитов и тетрад в 5— 10 %-ном растворе сахарозы

Благодаря тому что показатель преломления у каллозы несколько иной, чем у раствора сахарозы, каллозную оболочку микроспороцитов и тетрад можно наблюдать в световой микроскоп. Каллозная оболочка микроспороцитов и тетрад микроспор бесцветна и гомогенна.

Выявление каллозы анилиновым синим с последующим наблюдением под флуоресцентным микроскопом

Применительно к злакам этот способ окрашивания модифицирован И. Д. Романовым. Им подобрана оптимальная для пыльцы злаков концентрация флуорохрома.

Для исследования могут быть использованы свежие и фиксированные пыльники. Готовится 0.0025 %-ный раствор водорастворимого анилицового синего в 0.15 М растворе К2НР04 (рН 8.2). Содержимое пыльника выдавливается иглой в капли раствора на предметном стекле. Стенки пыльника удаляют. Объект накрывают покровным стеклом.

Исследование живой пыльцы злаков

«В каплю 5—10 %-ного раствора сахарозы в воде на предметном стекле помещают пыльник, который разрезают лезвием безопасной бритвы на 2 половинки. Из каждой половинки содержимое пыльника выдавливают в раствор. Стенки гнезд пыльника оставляют в капле раствора, чтобы избежать раздавливания пыльцевых зерен. Каплю раствора с содержащейся в ней пыльцой накрывают покровным стеклом.

Методики исследований пыльцы и пыльцевых трубок на рыльце и в пестике различных растений

Для окрашивания используется ацетокармин, приготовленный по стандартной методике, или смесь его с глицерином в равных частях. Предварительно фиксированные по Карнуа или другими фиксаторами пестики помещаются в ацетокармин или в смесь его с глицерином и слегка подогреваются (не доводить до кипения). Время окрашивания может сильно варьировать в зависимости от объекта.

Приготовление препарата ацетокармина

После окрашивания пыльников аце-токармином каждый из них промывают на предметном стекле последовательно в 2—3 каплях 45 %-ной уксусной кислоты, оттягивая загрязненную осадком ацетокармина уксусную кислоту полоской фильтровальной бумаги.

Окрашенный по Фёльгену пыльник сразу переносят в каплю 45 %-ной уксусной кислоты на предметное стекло и выдавливают материнские клетки пыльцы из гнезд пыльника следующим образом: придерживая один конец пыльника пинцетом, отрезают лезвием безопасной бритвы другой его конец и проводят тонкой упругой иглой в направлении от пинцета к отрезанному концу пыльника.

Окрашивание пыльников

При необходимости исследовать большое количество материала удобнее окрашивать пыльники ацетокармином. Препараты лучшего качества получаются из материала, зафиксированного по Ньюкомеру, так как при фиксации легче добиться равномерного уплощения протопласта клетки, а следовательно, наилучшего распределения хромосомных конфигураций в метафазной пластинке.

Окрашивание ацетокармином

Способ приготовления препарата зависит от размеров пыльника. Крупный пыльник помещается на предметное стекло в каплю ацетокармина, у него отрезается широкий конец и содержимое выдавливается в краситель. Оболочки пыльника удаляются, после чего капля красителя с материалом накрывается покровным стеклом. Мелкий пыльник целиком помещается в каплю ацетокармина. Приготовленный препарат несколько раз нагревается над пламенем спиртовки.

Эндоспермогенез

Фиксация по Карнуа после опыления проводится темпорально через 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 7, 8, 10, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 60, 72 и далее через 24 ч в течение 30 сут. Такие интервалы позволяют детально исследовать деление ядер эндосперма, заложение перегородок, образование вакуолей и т. п. Формирование эндосперма изучают в основном на продольных и поперечных срезах постоянных препаратов, толщина срезов которых составляет 10—15 мкм. Для изучения ранних стадий развития эндосперма можно использовать генцианвиолет по Ньютону без подкраски и танин—хлорное железо—сафранин и другие красители.

Эмбриогенез

Первую фиксацию завязей производят через 1 сут после опыления. В дальнейшем этот интервал выдерживают в течение 30 сут. Следует иметь в виду, что завязи в первые дни после опыления фиксируются плохо. На поздних стадиях развития зерновки приходилось делать наколы завязи или снимать часть покровов, или же отрезать верхнюю часть зерновки, чтобы ускорить проникновение фиксатора. Лучший фиксатор в данном случае — смесь Карнуа. Фиксатор Навашина для изучения средних и поздних стадий эмбриогенеза менее пригоден.