Факультет

Студентам

Посетителям

Методики исследований пыльцы и пыльцевых трубок на рыльце и в пестике различных растений

Для окрашивания используется ацетокармин, приготовленный по стандартной методике, или смесь его с глицерином в равных частях. Предварительно фиксированные по Карнуа или другими фиксаторами пестики помещаются в ацетокармин или в смесь его с глицерином и слегка подогреваются (не доводить до кипения). Время окрашивания может сильно варьировать в зависимости от объекта.

В результате пыльцевые трубки окрашиваются в красный цвет и хорошо видны на светло-розовом фоне проводящей ткани пестика.

Окрашивание хлопчатобумажным синим пыльцевых трубок пшеницы (Watkins, 1942). Рыльце пшеницы по сравнению с рыльцами столбиков других растений тонкое, поэтому нет необходимости его нагревать. Растворяется 0.5 г хлопчатобумажного синего (cotton blue) в 100 см3 лактофенола (молочная кислота + фенол + глицерин + вода — все в разных количествах). Фиксированные рыльца окрашиваются на стекле в растворе красителя. В случае переокрашивания дифференцируют их в лактофеноле. Для приготовления постоянного препарата рыльце можно заключить в глицерин-желатину или, обработав спиртом и ксилолом, — в бальзам.

Для сохранения препарата в течение нескольких суток края покровного стекла окантовывают расплавленным парафином.

Окрашенные в синий цвет пыльцевые трубки хорошо видны на фоне просветленной проводящей ткани столбика. На рыльце пестика пыльцевые зерна, образовавшие пыльцевую трубку, бесцветны. Непроросшие пыльцевые зерна окрашены в синий цвет. Сосочки рыльца часто также окрашиваются.

Исследование роста пыльцевых трубок в пестике при наблюдении в ультрафиолетовом свете. В последнее время при исследовании характера прорастания пыльцевых трубок в тканях пестика широкое применение нашел метод люминесцентной микроскопии. Он сочетает в себе быстроту приготовления препаратов с простотой исследования. С помощью люминесцентной микроскопии в довольно короткие сроки как на свежем, так и на фиксированном материале можно проследить за особенностями прорастания пыльцевых трубок и возможными нарушениями их роста в случаях несовместимости при скрещиваниях или самонесовместимости (булавовидные вздутия пыльцевых трубок, их ветвление, поворот в обратную сторону и т. п.).

Метод основан на специфической способности флуорохрома анилинового синего соединяться с каллозой, которая входит в оболочки пыльцевых трубок и образует каллозные пробки.

Препараты надо наблюдать сразу после изготовления. Исследование проводится с помощью люминесцентных микроскопов МУФ-2, МУФ-3, с лампами ДРШ-250 или СВД-120А, фильтрами УФС-3 или УФС-6, пропускающими Уф-лучи в области 365 нм. Можно также использовать осветитель ОИ-18 с любым микроскопом (фильтры те же).

Приготовление препаратов пыльцевых трубок злаков в столбике после окрашивания флуорохромом и наблюдение их люминесценции в ультрафиолетовом свете (Laloutte, 1967). Свежесобранные или фиксированные рыльца слабо нагревают в лактофеноле на предметном стекле, затем несколько раз рыльца промывают дистиллированной водой (лактофенол и вода оттягиваются фильтровальной бумагой). После оттягивания фильтровальной бумагой последней порции воды на пестик пипеткой накапывают раствор анилинового синего и накрывают покровным стеклом.

Для приготовления раствора флуорохрома используется только водорастворимый анилиновый синий. Сначала готовится 0.05 М раствор КrНР04, в котором и растворяется анилиновый синий (0.1 %). Первоначально раствор красителя имеет густой синий цвет. Для его подщелачивания (увеличения рН от 9 до 12) необходимо осторожно по каплям добавлять 1 н. раствор едкого калия или аммиака до получения светло-зеленого раствора.

Наблюдение рылец и столбиков под микроскопом может проводиться либо в растворе красителя, либо в 50 %-ном растворе глицерина в воде».

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: