Факультет

Студентам

Посетителям

Исследования бруцелл в S-, МВБ — и РВБ-форме с применением фага

Особый интерес представляет изучение влияния фага на измененные и неизмененные варианты бруцелл.

Это имеет значение при и (учении действия неагглютинабельных и обычных живых вакцин, ниодимых в организм животных, и для установления взаимодействия между глубоко измененными стабилизированными и реверсивными формами бруцелл и фагами.

Для исследования были взяты следующие 14 штаммов: в S-форме Br. abortus — штаммы 3-КП, № 16, ВС-53; Br. melitensis — штамм Mb 2506; Br. suis — штамм № 419; в МВБ-форме Br. abortus — штаммы № 75, 27, 201, 16; Br. suis — штамм №419/55; в РВБ-форме — штаммы № 931 и 3-КП.

Каждый из указанных выше штаммов бруцелл пересевали на жидкую питательную среду, содержащую стерильную гипериммунную сыворотку против Br. abortus и активный фаг 5-С. Отдельные штаммы пересевали до 9 раз с интервалом 3 нед, используя для этой цели питательные среды, условно названные а, б, с.

Основу каждой из указанных сред составлял мясо-пептонный бульон, содержащий 3% глицерина и 1 % глюкозы. К этой основе добавляли стерильную гипериммунную сыворотку крови крупного рогатоо скота из расчета 30% к среде а и 15% к среде б. Среду в использовали без добавления сыворотки.

Во все пробирки перед засевом их культурой изучаемых штаммов и водили 25% (по объему) активного фага, обладающего выраженной активностью в концентрации не менее 1—2-10-7, т. е. вызывающего выраженный лизис культуры Br. abortus референтного штамма № 54, на 1,5%-ной печеночной агаровой среде, содержащей в верхнем слое 0,7% агара Мартена.

Затем в каждую питательную среду вводили 0,1 мл односуточной культуры каждого штамма, содержащей в 1 мл 250 млн. микробных 1ел. Пробирки вначале выдерживали в холодильнике при 0… + 4°С к течение 5 ч, а затем в термостате в течение 36 ч. По истечении указанного срока микроскопически определяли морфологические особенности клеток, производили их высев на ППГГА в бактериологические чашки.

Основные штаммы в S-форме имели следующие морфологические отклонения в первой субкультуре.

До 30% клеток Br. abortus штамма № 16 в среде а были увеличены в 3—5 раз по сравнению с исходными, встречавшимися здесь же. Они имели более интенсивную окраску на обоих концах. Середина бактериальной клетки слегка просвечивалась. По Граму не окрашивались.

Аналогичные морфологические изменения клеток обнаружены к культуре штамма Br. melitensis в S-форме, но на среде в.

В культуре ВС-53 на среде а 80% клеток были удлинены в 2—3 раза по сравнению с исходными. Часть из них приобрела парную форму, напоминающую грамотрицательные диплобациллы.

Почти у всех клеток Br. abortus штамма 3-КП на среде а отмечалось значительное увеличение их размера, они имели округлую форму, по Граму не окрашивались. Среди них встречались резко увеличенные шаровидные формы, с намечающимся по середине бактериальной клетки просветом и более интенсивно окрашенными краями.

Остальные культуры основных штаммов (s-форма) в первой субкультуре на питательных средах а, б, в существенных морфологических отклонений не проявили.

Среди культур МВБ-форм выраженные морфологические отклонения были обнаружены в клетках штамма № 75. Здесь большинство клеток было резко увеличено. Встречались округлые и плохо очерченные формы (неровные края), удлиненные и соединенные попарно в виде диплококков. У отдельных клеток отмечались резко заметная окраска на полюсах и просвечивание в центре бактериальной клетки. Окраска по Граму наиболее крупных клеток неопределенная.

Культура МВБ-форм Br. suis штамма №419/55 содержала до 50% значительно (в 3—4 раза) удлиненных грамотрицательных клеток. В субкультурах 2, 3, 4, 5 и 7-й генераций также были обнаружены резко выраженные изменения. Принципиальное отличие их от измененных форм первой культуры состояло в том, что во всех случаях частично или полностью изменившиеся устойчивые формы окрашивались по Граму положительно.

Так, в культуре ВС-53 во 2-й генерации на той же среде появились глыбки, состоящие из увеличенных, как бы слитых вместе и частично расплавленных клеток. Участки с деформированным клеточным скоплением по Граму не окрашивались. Однако возникающая на этой основе грануляция в виде плохо оформившихся кокковидных или диплококковых образований чаще была грамположительной.

В дальнейшем, начиная с 3-й и 4-й генераций, в субкультурах репродуцировались кокковые и диплококковые грамположительные формы, сходные с теми, которые были описаны нами ранее (П. А. Триленко, 1967).

Сходные бактериальные формы в культурах других штаммов были получены в следующие сроки: штамма «Казак» в S-форме на средах а и б в 4-й генерации и на среде в в 7-й генерации; штамма № 16 на среде а в 4-й генерации, на среде в в 7-й генерации; Br. suis штамма №419 на всех трех средах в 5-й генерации.

В опытах с культурами сферопластов заметные морфологические изменения обнаружены только в 7—8-й генерации. У всех трех культур появилась тенденция к грамотрицательной окраске. В культуре штамма 3-КП на среде а в 7-й генерации клетки окрашены по Граму красный цвет, обнаруживаются склеивание и деформация клеток, видны клетки, соединенные в цепочки. В культуре штамма № 932 на среде в в 8-й генерации видны стрептококковидные, парные, со светлым центром клетки, окрашенные по Граму в темный цвет.

Ввиду того, что на средах а и б с сывороткой и фагом заметное ускорение и интенсивность изменений проявились в культурах типичных штаммов в S — и МВБ-форме, а в культурах сферопластов более выраженные изменения получены на среде в, без сыворотки, нами проведены исследования культуры сферопластов 3-КП, обработанной фагом 5-С под электронным микроскопом.

Эти исследования показали, что под воздействием фага бруцелл происходят интенсивное разрушение оболочки и выход плазмы из клетки сферопласта штамма 3-КП. Это свидетельствует не только о тропизме фага к МВБ-форме измененных бруцелл, но и о том, что сферопласты L-форм бруцелл имеют посыла слабую клеточную оболочку, которая легко разрушается фагом бруцелл.

Необходимо подчеркнуть, что сферопласты хорошо сохранялись в субкультурах. Это указывает на то, что они имеют, по-видимому, часть клеток, устойчивых к фагам бруцелл.

Ввиду частого первичного появления описанных сферопластов в культурах бруцелл нами изучены их некоторые особенности. При ном было установлено, что грамположительные сферопласты, во-первых, обладают антагонистическим действием на бруцелл в S-форме при совместном их культивировании, во-вторых, имеют очень слабую иммуногенность против бруцелл.

В научно-исследовательской проблемной лаборатории ЛВИ Л. П. Налево (1973) получила измененные варианты бруцелл, сходные с указанными выше, воздействуя фагом, гипериммунной сывороткой и некоторыми другими веществами на типичные в S — и МВБ-форме штаммы бруцелл.

Приведенные данные указывают на то, что бруцеллы подвержены изменчивости в различных неблагоприятных, точнее, в изменившихся условиях. Естественно поэтому предположить, что бруцеллы должны изменяться и в организме животных, тем более, что восприимчивые животные, заразившиеся бруцеллезом, во время развития в их организме инфекционного процесса вырабатывают специфические защитные приспособления против возбудителя, т. е. иммунитет в общем его виде. Следовательно, в момент заражения организм восприимчивых животных совершенно не такой в отношении противодействия бруцеллам, каким он становится после приобретения иммунитета. Несомненно, что противодействие организма бруцеллам влияет на их изменчивость. Именно эти соображения побудили нас провести многолетние исследования измененных вариантов бруцелл в организме восприимчивых к бруцеллезу сельскохозяйственных животных.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: