Факультет

Студентам

Посетителям

Жизнеспособность замороженных тканей семенников млекопитающих

Поскольку выяснилось, что сперматозоиды, с одной стороны, и ткань яичника — с другой, переживают обработку глицерином и охлаждение до температуры —79°, возникла мысль о возможности хранения таким же путем и ткани семенника.

Были проведены следующие опыты. У 7—9-дневных самцов крыс извлекали семенники, надрезали белочную оболочку, пропитывали семенные канальцы при комнатной температуре физиологическим раствором с глицерином или без него и производили гомотрансплантацию кастрированным взрослым крысам. В течение последующих 3-—4 месяцев наблюдали за половым поведением животных. Спустя 12—16 недель после операции их забивали, а семенные пузырьки взвешивали и фиксировали. Трансплантаты также фиксировали для гистологического исследования. Макроскопическое и микроскопическое исследование семенных пузырьков, которые хорошо развились в каждой группе у 5 животных из 8, показало, что они находились под влиянием андрогенных гормонов. В трансплантатах наблюдались большие участки соединительной ткани, окружающей семейные канальцы, выстланные сперматогониями и сперматоцитами первого порядка. В трансплантатах незамороженной ткани не были обнаружены ни сперматиды, ни полностью развившиеся сперматозоиды.

При имплантации кастрированным крысам ткани семенника взрослого животного, пропитанной физиологическим раствором, охлажденной до —79° и оттаянной спустя 1 час, в трансплантатах не восстановилось эндокринологической активности. Через 12 недель после имплантации животных забили. У 4 животных из 6 были обнаружены очень маленькие трансплантаты, в которых при гистологическом исследовании можно было различить рудиментарную ткань семенника. Семенные пузырьки полностью атрофировались, а в выстилающем эпителиальном слое не было обнаружено никаких признаков воздействия андрогенных гормонов. В противоположность этому в 7 гомотрансплантатах (из 8) обработанной глицерином ткани семенника неполовозрелых животных, охлажденной и хранившейся при —79° в течение 1 час, быстро развилась андрогенная активность;

об этом можно было судить по результатам спаривания кастрированных крыс, которым эту ткань имплантировали. У забитых животных через 12 недель обнаружили хорошо развитые семенные пузырьки. Трансплантаты имели большую величину и гистологически не отличались от трансплантатов незамороженной ткани. У 6 животных из 8 гомотрансплантаты ткани, хранившейся 1 неделю при температуре —79°, проявили эндокринологическую активность. Число активных трансплантатов уменьшалось по мере увеличения продолжительности хранения при —79°. Ткань, хранившаяся при этой температуре в течение 22 недель, проявляла андрогенную активность только у 4 из 9 кастрированных животных на протяжении 12—16 недель после имплантации. Несколько лучшие результаты были получены при консервации в жидком воздухе. Трансплантаты ткани семенника у этих 4 животных не отличались от гомотрансплантатов свежей ткани семенника неполовозрелых животных. Они содержали соединительную ткань и семенные канальцы, выстланные сперматогониями и сперматоцитами первого порядка.

Семенные канальцы в подкожных трансплантатах ткани семенника не имели выводных протоков, через которые окончательно созревшие сперматозоиды могли бы проникнуть в половые пути. Одно время считали, что именно вследствие этого обстоятельства в трансплантированных семенных канальцах не образовывались сперматиды и сперматозоиды. Однако при гомотрансплантации свежей ткани семенника в переднюю камеру глаза или в мошонку кастрированных самцов крыс, морских свинок и кроликов в этой ткани, несмотря на отсутствие выводных протоков, наблюдались все стадии сперматогенеза, включая окончательное созревание сперматозоидов. Завершение сперматогенеза в таких трансплантатах объясняли наличием более низкой температуры в водянистой влаге и в мошонке.

Более высокая, температура в области поясницы и боковой части живота, куда обычно имплантировали крысам семенники после их оттаивания, могла подавлять образование сперматозоидов. Динсли установила, что семенники неполовозрелых крыс, замороженные при 79 или —190°, подвергались полной дифференциации после оттаивания и имплантации в мошонку взрослых кастрированных самцов крыс. В замороженных семенных канальцах в течение многих месяцев вырабатывались нормальные подвижные сперматозоиды, несмотря на полное отсутствие выводных протоков, хотя эти гомотрансплантаты вызывали иммунологическую реакцию со стороны реципиента.

Когда препараты ткани семенных канальцев замораживали в растворе Рингера, в них при исследовании непосредственно под микроскопом наблюдалась внутриклеточная кристаллизация льда. На это указывало резкое «затемнение» клеток — результат рассеяния света многочисленными крошечными кристалликами, образовавшимися в клетках. При последующем оттаивании клетки полностью разрушались. Когда ткань помещали на агар, содержащий 15% глицерина, и окружали небольшим количеством раствора Рингера с добавлением 15% глицерина, в среде, окружающей клетки, происходила кристаллизация, но сами сперматоциты и сперматиды не подвергались никаким изменениям, пока температура не достигала уровня от —45 до —50°. В этом интервале температур несколько крупных клеток иногда «затемнелось», что указывало на образование кристаллов льда в цитоплазме. Большинство клеток (а в некоторых случаях и все) оставалось прозрачным и, по-видимому, не замораживалось в течение последующих 15—20 мин пребывания при этой температуре. После оттаивания препаратов, пропитанных глицерином, клетки, включая и те, которые содержали кристаллы льда, были интактными и имели нормальный внешний вид. К сожалению, не было никакой возможности определить на стадии замораживания, сохраняли ли они жизнеспособность, а также выяснить, замерзали ли изнутри те клетки, которые впоследствии в имплантатах хорошо размножались и дифференцировались.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: