Факультет

Студентам

Посетителям

Люминесцентно-микроскопическое выявление вирусных включений

Обычные методы окраски мелких полиэдров, характерных для представителей родов Birdiavirus и Bergoldiavirus, не дают желаемого результата, так как размеры вирусных включений незначительны, а общая масса их намного меньше, чем у насекомых при полиэдрозах общего типа, когда поражается большинство тканевых элементов.

В этом случае эффективным оказывается метод наведенной люминесценции. Подготовка препарата для люминесцентно-микроскопического анализа включений Birdiavirus заключается в следующем. Мазки фиксируют на пламени, затем препарат кратковременно обрабатывают эфиром для удаления жировых веществ. Обработка эфиром не сказывается на результатах анализа и позволяет освободиться от некоторого количества посторонних примесей. Необходимым моментом в подготовке мазка к флуорохромированию является протравливание его в течение 10 мин 5%-ным раствором карболовой кислоты. Остающуюся после протравливания мазка на препарате кислоту смывают дистиллированной водой, а остатки удаляют фильтровальной бумагой.

Флуорохромирование осуществляют в течение 15 мин акридиновым оранжевым в концентрации 1:40 000. Раствор флуорохрома готовят из основного 1 %-ного водного раствора с разбавлением до нужной концентрации фосфатным буфером с pH = 5,29. Препарат промывают водой и после высушивания просматривают в падающем сине-фиолетовом свете (фильтры 2ФС-1 и 2СЭС-7) с объективом масляной иммерсии. При этом вирусные включения-полиэдры люминесцируют желто-зеленым (И-1), бактерии — хромово-оранжевым (О-З), а тканевые остатки — коричневым (В-7) различной интенсивности. Цветовые обозначения приведены по шкале А. С. Бондарцева. При анализе свежего патологического материала полиэдры могут люминесцировать хромово-оранжевым, так как более интенсивно воспринимают краситель, чем тельца-включения, хранившиеся некоторое время. В этом случае следует уменьшить время флуорохромирования и дифференцировать окрашенный препарат 2%-ной соляной кислотой с последующим промыванием водопроводной водой.

Указанный метод позволяет выявлять полиэдры при смешанных заболеваниях насекомых и при анализах загнившего или сухого материала, когда в препаратах содержится огромное количество сапрофитных микроорганизмов.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: