Факультет

Студентам

Посетителям

Электронная микроскопия вирусных включений

По технике электронной микроскопии имеется огромное количество монографических работ.

В данном разделе рассматриваются лишь наиболее простые технические приемы, которые могут быть полезны при диагностике вирусных болезней насекомых.

Пленки-подложки для электронно-микроскопических препаратов могут быть коллодиевые или углеродные. Для получения коллодиевых пленок каплю 1%-ного раствора коллодия в амилацетате наносят на поверхность дистиллированной воды, налитой в плоскодонный сосуд. Можно использовать чашку Петри или кристаллизатор диаметром около 20 см. Коллодий образует на поверхности воды тонкую пленку. Если на дне сосуда предварительно поместить предметное стекло с сеточками и затем понизить уровень воды, то пленка опустится на их поверхность. Углеродные пленки-подложки получают испарением углерода в вакууме. В качестве субстрата используют стекло или свежий скол слюды. Пленки отслаиваются при погружении стекла или слюды в воду. Затем их помещают на электронно-микроскопические сеточки таким же способом, как и коллодиевые пленки.

Исследуемый материал в виде взвеси вирусных включений в дистиллированной воде помещают на пленку-подложку, через 5—10 мин избыток жидкости удаляют, препарат подсушивают и просматривают под электронным микроскопом.

С целью установления формы и размеров элементарных вирусных частиц включения целесообразно разрушать непосредственно на пленке-подложке. В этом случае препарат погружают в 0,2%-ный раствор едкого натра. Время на частичное разрушение белка включений может составлять от 5 до 30 мин и более в зависимости от вида и срока хранения материала. Оптимальное время щелочной экспозиции подбирают эмпирически для каждого отдельного случая. Контролируют состояние

полиэдров в обычном световом микроскопе при освещении через объектив. Разбухание включений свидетельствует о начале просветления белкового матрикса, а появление изъязвления на одной из сторон — о глубоком разрушении кристаллического белка и полном освобождении вирионов. После щелочного воздействия препараты ополаскивают дистиллированной водой и 10—30 сек контрастируют 2%-ным раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты. Избыток кислоты удаляют фильтровальной бумагой.

Представление об объемной форме вирусных включений можно составить при просмотре самооттененных угольных реплик. Готовят их следующим образом. Взвесь вирусных включений в дистиллированной воде равномерно распределяют на покровных стеклах, высушивают и помещают в условия вакуумной камеры, где испаряют углерод. Полученную угольную пленку отделяют, выдерживая стекла в течение 10—14 ч на поверхности концентрированной серной или плавиковой кислоты, затем промывают дистиллированной водой и помещают на предметные сетки.

При приготовлении гистологических препаратов для электронно-микроскопического изучения образцы ткани фиксируют четырехокисью осмия. Используют обычно 2%-ный раствор фиксатора с рН = 5,7:8. Продолжительность фиксации материала 2 ч. Ткань обезвоживают в спиртах с концентрацией 50, 75 и 95%, затем переносят в дважды сменяемый абсолютный спирт и заливают в метакрилат. Срезы контрастируют фосфорно-вольфрамовой кислотой по Рейнольдсу.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: