Факультет

Студентам

Посетителям

Замораживание других тканей куриного эмбриона

Различные ткани куриного эмбриона (помимо сердца и мышечных элементов амниона) обладают в известной степени устойчивостью к замораживанию в нормальной среде.

Помера и Льюис обнаружили, что кусочки мышцы ноги 11—13-дневного куриного эмбриона переживали быстрое охлаждение до —11° и последующее оттаивание, а при посеве росли, ничем не отличаясь от незамороженных контрольных препаратов. Критическая точка температуры лежала где-то в пределах от —18 до —21°. Ниже этой температуры мышечные волокна немедленно погибали. Правда, веретенообразные клетки переживали замораживание мышечной ткани даже при —39°. При быстром охлаждении кусочков кожи 12—13-дневного эмбриона до —8° и последующем оттаивании рост эпителиальных клеток в культуре снижался. Когда же кожу замораживали при —18 или —26°, эпителиальные клетки обычно разрушались. Лишь в одном опыте эпителиальные клетки, охлажденные до —29,8° в течение 43 сек, при посеве дали пышный рост. Веретенообразные клетки росли в культурах кожи, замороженной при —39,2°. При любой температуре ниже нуля степень повреждения клеток была тем больше, чем продолжительнее было хранение. Однако окончательный распад эпидермальных клеток наступал лишь после хранения их в течение 1,5—3 час при температуре от —14,5 до

— 16,0°. Веретенообразные же клетки переживали хранение в холодильнике при такой температуре в течение 9—12 час. Кусочки скелетной мышцы эмбриона давали рост, если только их хранили при —14,5° не более 6,75—9 час. Веретенообразные клетки прорастали из эксплантатов мышцы, выдерживавшейся различное время (до 20, но не 24 час) при температуре от —14,5 до —16,5°. Обработанные 5- или 10-процентным раствором глицерина, эпителиальные клетки и мышечные волокна куриного эмбриона переживали быстрое замораживание при —50° независимо от того, были ли они согреты тотчас же после охлаждения или же их хранили при данной температуре в течение различных периодов времени до 10 дней.

В последние годы были разработаны тонкие методы, позволяющие изучать развитие скелетных структур в культурах тканей. Например, рудиментарные большеберцовые хрящи 6—7-дневного куриного эмбриона хорошо растут и дифференцируются in vitro при посеве на соответствующую среду. Кости куриного эмбриона и их хрящевые эпифизы не переживали замораживания при —79° в обычном физиологическом растворе, но, когда их обрабатывали 15-процентным раствором глицерина и медленно охлаждали до —79°, они сохраняли жизнеспособность и после оттаивания и посева хорошо развивались. Хрящевые клетки эпифиза при гистологическом исследовании имели нормальный внешний вид, и в некоторых из них можно было наблюдать митоз. Никаких явлений некроза в эпифизе не отмечалось, а в диафизе лишь некоторые клетки выглядели дегенерировавшими и основное вещество кости, проявлявшее незначительные нарушения структуры, окрашивалось, как обычно, метахроматически метиленовым синим. Когда таким же способом обработали глицерином и охладили до —79° большую берцовую кость 7-дневного куриного эмбриона, она развивалась в культуре хуже, чем незамороженная контрольная, хотя эпифизы увеличивались нормально. Гистологическое исследование показало полную сохранность большинства клеток эпифиза и очень маленькие участки некроза. В диафизе, однако, было обнаружено большое число разрушенных или поврежденных клеток, хотя надкостница и зона периостального формирования кости, по-видимому, не пострадали. Интересно, что с возрастом эмбриона (даже при однодневной разнице) клетки диафиза становились более чувствительными к замораживанию, несмотря на наличие в среде глицерина. Некоторые изменения в основном веществе кости, а также изменения проницаемости оболочки более старых клеток, возможно, не позволяли глицерину проникать внутрь клеток. Это было подтверждено в дальнейшем в опытах на хряще млекопитающих, который можно хранить при низкой температуре в присутствии глицерина при условии, что клетки перед обработкой их глицерином отделяют от основного вещества кости посредством разрушения последнего с помощью соответствующего фермента.

Еще в 1907 г. Гаррисон, использовав эмбрионов лягушки, культивировал нервные клетки и нервные волокна эмбриональной нервной ткани, а в 1911 г. Бэрроуз повторил его опыты на куриных эмбрионах. Следует, однако, отметить, что ни в опытах указанных авторов, ни в опытах более поздних исследователей эти ткани не пролиферировали так активно, как другие эмбриональные ткани. Тем не менее Люйет и Гонсалес обнаружили, что головной мозг куриного эмбриона, обработанный 60-процентным раствором этиленгликоля, быстро охлажденный до температуры жидкого азота и затем согретый, давал рост типичных нервных волокон, идентифицированных при помощи импрегнации серебром. Наблюдалась также миграция клеток, имеющих сферическое тело и удлиненные униполярные и биполярные отростки. Вне всякого сомнения, нервные клетки переживали воздействие очень низких температур.

Куриные эмбрионы, начиная со стадии первичной полоски (8 час инкубации) и кончая стадией образования головной складки (20 час инкубации), отделяли от желтка и рассекали в поперечном направлении позади гензеновского узелка. Передние участки обрабатывали 60-процентным раствором этиленгликоля и погружали на 1 мин в жидкий азот. Затем их быстро согревали в растворе Рингера и культивировали в среде, состоящей из экстракта альбумина и разведенного в физиологическом растворе агара. У большинства замороженных эмбрионов наблюдались некоторые признаки регенерации клеток, например закрытие нервной складки или образование сомитов у обрезанного конца. Сердечная деятельность восстановилась, а в 5 опытах из 30 образовались головной мозг, глазные пузыри и нервная трубка. Эмбрионы в своем развитии лишь слегка отставали от незамороженных контрольных. Полученные результаты показывают, что замороженные и согретые куриные эмбрионы сохраняли, по крайней мере частично, способность к морфологической и физиологической дифференциации, а также к восстановлению или возмещению удаленных частей, включая такие сложные органы, как зачатки глаза и головного мозга. До настоящего времени не удалось добиться полного развития в инкубаторе изолированных, но интактных эмбрионов, как охлажденных, так и не подвергавшихся замораживанию.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: