Факультет

Студентам

Посетителям

Гистологические исследования живых клеток и тканей при замораживании

Гистологические исследования проводили на тканях, медленно охлажденных до —79° и фиксированных при этой температуре абсолютным спиртом или 10-процентным раствором формалина в спирте в течение 3—21 дня.

Фиксированные ткани согревали, обезвоживали, просветляли и заключали; затем приготовляли срезы и окрашивали обычно принятыми способами. Херд установил, что медленное замораживание при —79° вызывало заметные гистологические изменения в свежих тканях печени, сердца, мышц, селезенки, мозга и других органах крыс. Медленно охлаждая печень до —4, —6 и —26° и фиксируя ее при этих температурах, Херд обнаружил, что многие ядра растянулись и в них появились большие палочковидные пространства, заполненные, по его предположению, кристаллами льда. Повторное исследование охлажденного и фиксированного при —79° материала показало, что многие из этих пространств были окаймлены тонкой темной полоской хроматина. Херд пришел к заключению, что в процессе медленного охлаждения внутри ядер образовывались кристаллы льда. Динсли также наблюдала в замороженных и фиксированных при —79° половых железах крысы появление внутри клеток и внутри ядер пространств, по-видимому, образованных кристаллами льда. При этом она отметила также сморщивание всех клеток. Такой же вид имели ткани, предварительно пропитанные средами с глицерином, охлажденные и фиксированные при температуре —79°. Это наблюдение представляет определенный интерес, так как оно позволяет надеяться, что обработанные глицерином половые железы крысы при трансплантации их после замораживания до —79° и оттаивания окажутся жизнеспособными, тогда как половые железы крысы, пропитанные физиологическим раствором, замороженные по тому же способу, не приживали после трансплантации и, по-видимому, погибали. Динсли обратила внимание также на то, что ткани, фиксированные после оттаивания, имели нормальный вид независимо от того, были ли они заморожены в присутствии глицерина, когда хотя бы какая-то часть клеток была потенциально жизнеспособной, или без него, когда подавляющее большинство клеток погибало.

Всякого рода гистологические нарушения всегда очень трудно истолковать. Известно, что многие изменения гистологического и цитологического порядка наступают в тканях во время фиксации при комнатной температуре в результате диффузии, растворения, осаждения и других процессов. Особенно трудно объяснить появление отверстий в клетках и тканях, поскольку это может быть следствием удаления липидов или других компонентов клетки. Медленное проникновение и действие фиксаторов при низких температурах может вызвать дополнительно какие-то артефакты, помимо тех, которые возникают при температурах выше нуля. Тем не менее, нельзя не обратить внимания на наблюдения Херда и Динсли, согласно которым во время медленного охлаждения может происходить внутриядерная кристаллизация льда. Не получены еще ответы на два основных вопроса: переживают ли клетки внутриядерную и внутриклеточную кристаллизацию, а если нет, то не являются ли кристаллы, как таковые, причиной гибели клеток?

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: