Факультет

Студентам

Посетителям

Хранение обработанных глицерином эритроцитов при температуре —15, —20 и —45°

Результаты первых опытов по хранению обработанных глицерином эритроцитов человека при —45° были не очень обнадеживающими.

Цитратную кровь, из которой удалили около половины надосадочной плазмы, обрабатывали равным объемом 30-процентного раствора глицерина в физиологическом растворе и оставляли в морозильной камере с температурой —15°. Замораживание происходило медленно, и эритроциты, проходя через канальцы, образовавшиеся между кристаллами льда, постепенно оседали в виде слоя под этими кристаллами. При оттаивании через 29 дней гемолизовалось около 50% эритроцитов, а при оттаивании через 80 дней восстановилось всего лишь около 20%. После удаления глицерина посредством диализа эритроциты переливали вместе с незамороженными контрольными клетками. Результаты опыта показали, что клетки, восстановившиеся после хранения в течение 29—84 дней при температуре —15°, вели себя нормально в кровотоке реципиентов.

Браун и Хардин сообщили, что при хранении эритроцитов в течение 50 дней при —15° в 0,16 М растворе лактата натрия, содержащем 50% (вес/объем) глицерина, восстанавливалось 79% клеток. Однако после переливания жизнеспособными были только 47% эритроцитов, вероятно вследствие слишком высокой концентрации глицерина, вызвавшей их повреждение.

Эритроциты, взвешенные в 3-процентном растворе цитрата натрия или калия, содержащем 30% глицерина, при температуре —20°, после переливания быстро утрачивали жизнеспособность. Возможно, это было обусловлено щелочностью раствора, поскольку эритроциты, взвешенные в 30-процентном растворе глицерина в цитрате калия, забуференном до pH 6,9, или в 30-процеНт — ном растворе глицерина в нитратной плазме с pH 7,4, отличались почти нормальной жизнеспособностью, когда их переливали после хранения в течение 3 месяцев при температуре —20°. Затем они начали постепенно разрушаться, и через 30 недель инкубирования при температуре —20° лишь около 50% клеток сохраняли жизнеспособность после переливания. Спустя год эритроциты, хранившиеся при этой температуре, все еще сохраняли свою антигенную специфичность. Такую методику широко применяют для хранения небольших проб крови редких групп для диагностических целей. При —20° биохимические процессы полностью еще не прекращаются и эритроциты медленно используют декстрозу. Это может служить, хотя бы отчасти, причиной их разрушения при данной температуре.

В последующих опытах в растворы цитрата натрия или калия, забуференные фосфатами до pH 7,0, добавляли 0,005 М глюкозу, а также глицерин в различных концентрациях. Эритроциты взвешивали в различных средах и хранили при температуре от —20 до —45° в течение 3 лет. Обычно 85—95% первоначально замороженных эритроцитов восстанавливалось после отмывания их в растворах с понижающейся концентрацией глицерина.

Результаты этих опытов были лучше, чем те, которые получали при хранении эритроцитов при температуре —20° в растворах, не содержащих глюкозы. Самопроизвольный гемолиз, наступающий во время хранения при —20°, был наименьшим в средах с конечной концентрацией глицерина 6,5 М и наибольшим при концентрации глицерина 2,5 М. Если эритроциты хранили в этих растворах при —45°, гемолиз был весьма незначительным, когда концентрация глицерина составляла 4,0 М и выше. Спустя 1 год хранения при температуре —45° после отмывания от глицерина восстанавливалось 96—100% эритроцитов, замороженных ранее в 4,5 или 7.0 М растворе глицерина.

Эритроциты, хранившиеся при температуре —20°, отмывали от глицерина и вводили реципиенту. Затем следили за продолжительностью их жизни в кровотоке. Данные показывают, что после хранения в течение 6 месяцев при температуре —20° спустя 24 час после переливания в кровяном русле обнаруживается 60—85% эритроцитов. Потеря клеток была слишком велика, чтобы можно было рекомендовать продолжительное хранение крови, предназначенной для переливания, при температуре —20°.

Когда кровь, хранившуюся при температуре —45°, отмывали от глицерина и переливали в кровоток реципиента, последующее выживание эритроцитов зависело от концентрации глицерина, воздействию которого они подвергались. Эритроциты, хранившиеся в 4,5 М растворе глицерина в течение различных периодов времени (до 8 месяцев), лишь незначительно утрачивали жизнеспособность. Гораздо меньшее число эритроцитов от того же донора переживало такой же срок хранения при температуре —45° в 7,0 М растворе глицерина. Кратковременное воздействие глицерина в концентрации более 6,0 М при температуре выше нуля наносило повреждение эритроцитам, у которых после удаления глицерина как in vitro, так и после переливания наблюдался гемолиз. Концентрация глицерина в клетках после отмывания составляла всего 0,002 М, так что быстрое разрушение их после введения в кровоток отнюдь не было результатом неполного удаления глицерина, как предполагали Браун и Хардин.

Описанные выше исследования показали, что эритроциты человека можно сохранять в течение 1 года без последующей большой потери их жизнеспособности в средах с относительно умеренным содержанием глицерина при температуре —45°. Однако нет никаких сомнений, что в пределах температур от —80 до —120° продолжительность хранения можно увеличить.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: