Факультет

Студентам

Посетителям

Сохранение эритроцитов при помощи быстрого замораживания или быстрой лиофилизации без глицерина

В 1955 г. Меримэн и Кейфиг сообщили, что им удалось заморозить маленькие пробы цельной крови, разбрызгивая ее пульверизатором на поверхности жидкого азота при —196°.

Кровь разбавляли кислым раствором цитрата натрия, содержащим глюкозу. Охлаждение производили достаточно быстро во избежание повреждений, которые вызывает продолжительное воздействие концентрированных солей во время замораживания. Быстрое оттаивание осуществляли путем распыления замороженного порошка в плазме или физиологическом растворе при +42°. Затем пробы крови метили Cr51 и переливали реципиентам. Хотя в последующие 2 недели эритроциты исчезали быстрее, чем в норме, какая-то часть их выживала. Было бы крайне интересно проследить результаты переливания больших количеств крови, хранившейся продолжительное время при температуре — 196° после быстрого замораживания по методу Меримэна. Здесь могут возникнуть затруднения в связи с тем, что эритроциты чувствительны к чрезмерно быстрому охлаждению. Кроме того, трудно выдерживать оптимальную скорость охлаждения в тех случаях, когда требуется распылять большие объемы крови. Однако тот факт, что в таких условиях ни до, ни после замораживания не требуется проводить никаких дополнительных операций (ничего не надо добавлять в кровь или выделять из нее), представляет собой достаточно большое преимущество, и это преимущество перевешивает некоторые технические трудности, связанные с очень быстрым замораживанием и оттаиванием больших объемов крови без заражения или повреждения клеток.

В 1950 г. мы совместно с Полджем попытались консервировать эритроциты при помощи высушивания. Высушивание путем возгонки льда из тонкой пленки крови, замороженной до температуры от — 20 до — 40°, не представляло затруднений, но как только остаток увлажняли водой, физиологическим раствором, плазмой или гипертоническим раствором, немедленно наступал гемолиз. Все попытки провести регидратацию посредством распыления или восстановления льда с помощью обратного процесса возгонки также потерпели неудачу.

Недавно Кейфиг обнаружил, что большинство лиофилизированных эритроцитов оставались неповрежденными, когда их восстанавливали изотоническим солевым раствором с добавлением 40% декстрана. Суспензию крови наносили на салфетку из нейлоновой марли, подвешенную в сушильной камере. В результате понижения давления вода испарялась, температура падала и кровь замерзала. Возгонку льда осуществляли при температуре —30° в течение первых 3—4 мин. Затем температуру повышали до комнатной. Когда в высушенное вещество вводили 40% декстрана, восстанавливались абсолютно все клетки. Эритроциты высушивали и увлажняли вышеуказанным образом, метили Cr51 и вводили внутривенно животным; при этом их жизнеспособность в кровяном русле реципиента полностью сохранялась. К сожалению, не измеряли остаточного количества воды в пробах крови. Меримэн отмечает, что при увеличении продолжительности высушивания (до 1 час и более), увлажняя сухой остаток растворами с высокой концентрацией декстрана, уже нельзя было получить неповрежденные клетки. Если высушенный материал до увлажнения оставляли на несколько часов в атмосфере с низким давлением водяного Пара, некоторые неповрежденные клетки восстанавливались. Лиофилизированные эритроциты человека хранили в сухом состоянии свыше 1 года. После восстановления их с помощью декстрана неповрежденной оставалась лишь небольшая часть клеток.

До настоящего времени эти важные результаты не подтверждены другими исследователями. Мы не знаем, чему должна равняться остаточная влажность клеток. Для того чтобы проверить жизнеспособность лиофилизированных, а затем увлажненных эритроцитов человека, необходимо провести опыты по введению их в кровяное русло. Возможно, длительное хранение эритроцитов сопряжено с определенными трудностями, особенно при критическом уровне остаточной влажности, как это имеет место при хранении высушенных бактерий. Может быть, пройдет еще много времени, прежде чем метод консервации с помощью низких температур в средах, содержащих глицерин, уступит место методу лиофилизации. Тем не менее уже сейчас перед нами открываются заманчивые перспективы. Поставлены и ждут своего разрешения вопросы, имеющие важнейшее принципиальное значение. В первую очередь они касаются оптимальных условий сохранения структурной целостности клеток и их биохимических компонентов, включая липопротеиды и другие комплексы молекул, которые в чистом виде в процессе лиофилизации теряют присущие им свойства.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: