Факультет

Студентам

Посетителям

Азановый метод по Гайденгайну гистологического исследования почвенных животных

Азановый метод по Гайденгайну является модификацией метода Маллори, дающей более четкое и красивое окрашивание препаратов.

Особенно пригоден этот метод для окраски покровов беспозвоночных, поскольку дает дифференцированное окрашивание их слоев. Эта окраска лучше всего удается после фиксации объектов жидкостью Ценкера.

Препараты, освобожденные от парафина, помещают в растворе азокармина (0,1 г азокармина растворяют в 100 мл дистиллированной воды, кипятят, охлаждают, фильтруют и добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты) в термостат при температуре 56° на 20 мин., затем при комнатной температуре споласкивают дистиллированной водой, дифференцируют в спиртовом анилиновом растворе (1 см3 анилинового масла на 1 л 90°-ного спирта). Дифференцируют до тех пор, пока не выступят отчетливо ядра клеток. Препарат быстро споласкивают уксуснокислым спиртом (1 мл ледяной уксусной кислоты на 100 мл 96°-ного спирта). Затем препараты протравливают в течение часа в 5%-ном растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты, ополаскивают дистиллированной водой и окрашивают в анилиновом сине-оранжевом — уксусной кислоте. Для приготовления этого красителя растворяют 0,5 г анилинового синего и 2 г оранжевого золотого в 100 мл воды и приливают 8 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор кипятят и разбавляют трехкратным количеством дистиллированной воды. После окраски препараты дифференцируют 96°-ным спиртом, последовательно проводят по спиртам, возрастающей концентрации, включая абсолютный спирт, промывают в ксилоле и заключают в бальзам. Соединительные ткани этим методом окрашиваются в синий цвет, хроматин — в красный, мышечная ткань — в розовый, слизистое вещество — в голубой. Покровы окрашиваются так: гиподерма имеет фиолетовый цвет, эндокутикула — ярко-голубой, экзокутикула — красный.

При изготовлении гистологических препаратов целых животных, имеющих твердые покровы, необходимо предварительно размягчить кутикулу раствором диафанола. Раствор диафанола представляет собой 50%-ную укусную кислоту, насыщенную на льду парами двуокиси хлора. Эту смесь нужно хранить в прохладном темном месте в стеклянной посуде с притертой пробкой (с диафанолом необходимо работать под тягой, так как он ядовит). Фиксированный материал ополаскивают 63%-ным раствором спирта и заливают диафанолом. Диафанол с находящимся в нем объектом выставляют на дневной свет, пока кутикула не побелеет и не размягчится. После размягчения покровов объект промывают в 63%-ном спирте и затем подвергают дальнейшему обезвоживанию и заливке.

Для изучения морфологического строения таких беспозвоночных, как мокрицы, кивсяки, личинки мух-львинок, в покровах которых есть включения углекислого кальция, необходимо в качестве фиксирующих смесей применять такие, которые содержат уксусную кислоту. Это — жидкости Буэна, Ценкера, причем количество ледяной уксусной кислоты в этих смесях необходимо удвоить в сравнении с обычно применяемым.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: