Факультет

Студентам

Посетителям

Плазмидный скрининг

Бактерии большинства видов имеют внехромосомные, автономно реплицирующиеся генетические элементы — плазмиды, которые способны нести информацию, кодирующую антибиотикоустойчивостъ, бактериоциногенностъ, продукцию токсинов, гемолизинов и других биологически активных веществ.

Плазмидный скрининг успешно используют для решения различных практических задач, связанных с идентификацией и внутривидовым типированием патогенных микроорганизмов, дифференциацией штаммов по их эпидемиологической и эпизоотологической значимости.

Для проведения плазмидного скрининга применяют метод (C. I. Kado, S. T. Liu, 1981) в различных модификациях, включающий три основных этапа: 1) выращивание бактерий; 2) их сбор и лизис клеток для выделения ДНК; 3) очистка плазмидной ДНК. После этого плазмидные репликоны разделяют методом электрофореза в 0,7%-м агарозном геле. Для оценки результатов гель окрашивают раствором бромида этидия (0,5 мкг/мл) и просматривают его в ультрафиолете на трансиллюминаторе. Для регистрации результатов применяют специализированную систему обработки изображений (компьютерная гельдокументирующая система).

Простота и быстрота метода определения плазмидного профиля позволяют использовать его для дифференциации возбудителей инфекционных заболеваний.

Плазмидный скрининг (Т. В. Спиряхина, 2006) использовали для определения плазмидного профиля штаммов Y enterocolitica, изолированных от сельскохозяйственных животных. Эти микроорганизмы представляют собой разнородную группу бактерий как внутри вида, так и в пределах отдельных серогрупп и биоваров. Поэтому важно подтверждение патогенности выделенной культуры. По современным воззрениям проявление патогенных свойств связано с присутствием в клетках Y. enterocolitica плазмиды pYV молекулярной массой 45…47 мД и экспрессией кодируемых ею белков. В результате плазмидного скрининга было установлено, что в клетках 7 из 49 проверенных штаммов Y. enterocolitica имеется внехромосомный репликон. Молекулярная масса плазмидной ДНК, обнаруженной в исследованных штаммах кишечно-иерсиниозного микроба, оказалась равной 45…47 мД, т. е. соответствовала величине, характерной для плазмиды вирулентности pYV. Плазмида была обнаружена только у культур, выделенных от павших и больных поросят. Это позволило характеризовать штаммы, изолированные от свиней, как более эпидемиологически и эпизоотологически значимые.

Использование плазмидного анализа для внутривидового типирования микроорганизмов общепризнанно. Этот метод применяют не только для Y. enterocolitica, но и для других бактерий. Плазмидный анализ использовали для определения потенциальной патогенности Salmonella typhimurium, учитывая, что в этиологии внутрибольничного сальмонеллеза основную часть составляют полирезистентные штаммы этого микроорганизма, содержащие в геноме одну или несколько R-плазмид (С. В. Балахонов, С. Э. Лапа, В. И. Пинтусов, 2005). Подобная микробная популяция имеет высокую способность инфицирования людей, что связано с активным функционированием генов, ассоциированных с экспрессией факторов инвазивности.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: