Отдельные исследователи пытались выделить растворимые белки без всякого подразделения на альбумины, глобулины или глиадины с помощью таких методов, как ионообменная хроматография на целлюлозе или препаративный электрофорез. В общем некоторые типы аналитического электрофореза (электрофорез в растворе или зональный) использовались для установления эффективности разделения.
Электрофорез на крахмальном геле экстрактов пшеничной муки с низким рН позволил четко отделить растворимые белки от составных частей клейковины. При указанных условиях экстракции и проведении электрофореза при рН 3—4 почти весь белок извлекался и передвигался по направлению к катоду. Сравнительное разделение и электрофоретический анализ показали, что наиболее быстро передвигающиеся компоненты относятся к классу глобулинов, за которыми следуют альбумины. Сложность комплексной системы, которая предполагалась ранее, получила подтверждение. В настоящее время нельзя составить определенного представления о количестве так называемых неклейковинных белков.
Экстракция при значениях рН, близких к нейтральному, давала другую картину: около 20% общего белка муки экстрагировалось водой и от 8 до 10% 0,1М хлористым натрием при соотношении растворителя и муки, равном 2 : 1. Электрофоретический анализ показал, что такие системы должны содержать по крайней мере пять компонентов при использовании электрофореза в растворе и около 15 компонентов при использовании зонального электрофореза на крахмальном или полиакриламидном геле. В другой работе белки, извлеченные растворами хлористого натрия (концентрация от 0,1 до 0,5М) и буферными растворами с рН 3,9 и 8,6, исследовались методом электрофореза в растворе при широком интервале значений рН (3,9; 8,6; 9,1 и 10,3). При наличии определенных колебаний в количестве и типе экстрагированных белков было обнаружено более 10 компонетов.
Фракционирование таких экстрактов методом хроматографии на целлюлозном анионите (ДЭАЭ-целлюлозе) приводило к значительному кон-центрированию компонентов, хотя ни один из них не был, по — видимому, вполне гомогенным. Однако повторное хроматографирование фракции, собранных с ДЭАЭ-целлюлозы, давало препараты лишь с ничтожным взаимным загрязнением, как было установлено с помощью электрофореза в растворе. У двух основных таких фракций серии был единственной N-концевой аминокислотой, а у других — серии и треонин.
Значительная часть материала, экстрагированного при рН, близком к нейтральному, проходит через ДЭАЭ-целлюлозу, не задерживаясь.
Около половины этой части составляет полисахаридный материал, состоящий из арабинозы, ксилозы и некоторого количества галактозы. Углеводно-белковый комплекс частично был разделен путем повторного хромато — графирования на целлюлозном катионите карбоксиметилцеллюлозе с использованием боратного буфера. Было установлено, что белок этого не адсорбированного материала отличается высоким содержанием амидов и глютаминовой кислоты, приближающимся к содержанию их в клейковине, и в отношении аминокислотного состава заметно отличается от белков, фракционированных на целлюлозных анионитах. Была ясно показана тесная связь углевода с фракциями, выделенными из этих белковых систем. Те же авторы показали, что заметное количество ионов ряда металлов непосредственно связывается с более щелочными по своим свойствам белками и может быть удалено только в результате фракционирования при рН 4,1.
Тогда как попытки получения чистых белковых фракций оказались неудачными (они обычно были загрязнены углеводом), изучение пентозанов пшеницы показало, что эти полисахариды можно разделить на целлюлозном анионите, используя свойства небольших количеств ассоциированных белков. В четырех из пяти пентозанных фракций, исследованных таким путем, было найдено от 17 до 37% белка. Все пентозаны содержали арабинозу, ксилозу и галактозу.
Для обнаружения растворимых белковых компонентов пшеницы и ячменя, разделенных с помощью электрофореза на агаровом геле, была использована иммунохимическая преципитация. От 8 до 10 белковых компонентов было обнаружено в виде дуг преципитации методом двойной диффузии.
Этот метод улавливает количества антигенного белка, составляющие доли микрограмма, и имеет ценное свойство специфичности, присущее иммунохимическим реакциям. Таким образом, чтобы получить более ясное представление о количестве отдельных компонентов белка, при соответствующих условиях эти результаты можно сочетать с результатами, полученными методами, основанными на способности белков связывать краски.