Из минеральных азотсодержащих веществ в питательных средах наиболее часто используют аммонийные соли серной, соляной или азотной кислот.
В случае, если в качестве источника азота желательно иметь нитрат-ион, его вводят в виде калиевой или натриевой соли. Наиболее распространен в качестве минерального азотсодержащего компонента среды сульфат аммония, он оказывается пригодным для биосинтеза почти всех известных антибиотиков (кроме новобиоцина). В опытах Н. В. Орловой и Т. П. Верховцевой (1959) наилучшим из изученных источников азота для биосинтеза хлортетрациклина оказался хлористый аммоний, а для окситетрациклина — сульфат аммония, хотя известно, что эти антибиотики весьма близки по строению. В случае одновременного присутствия в среде ионов аммония и нитратов продуцент хлортетрациклина Act. aureofaciens вовсе не включает в метаболизм нитратный ион. Однако тогда, когда ион аммония в среде отсутствует, до 45% присутствующего в среде нитрата оказывается использованным.
Влияние источника азота на биосинтез антибиотика зависит не только непосредственно от самого источника азота, но также и от общей композиции среды. Существенное значение в этом имеет отношение присутствующего в среде азота к углероду (N : С). Применительно к каждому штамму-продуценту эта величина будет различной. Сущность создания питательной среды для биосинтеза заключается в подборе такой композиции, которая обеспечивала бы накопление метаболитов-полупродуктов молекулы антибиотика и соответствующих ферментных систем, осуществляющих синтез.