Факультет

Студентам

Посетителям

Диагностирование гриппа

Предварительный диагноз ставят на основании эпизоотологических данных и симптомов болезни.

Возникновению гриппа часто предшествует ввод новой партии лошадей в хозяйство.

Болезнь характеризуется высокой контагиозностью, быстрым охватом большого поголовья лошадей, коротким инкубационным периодом и непродолжительным течением.

Важными диагностическими признаками являются: катаральное состояние слизистых оболочек, повышенная чувствительность глотки и трахеи при легком сдавливании, сухой болезненный кашель. Температура у больных лошадей не является постоянным признаком. Продолжительность лихорадки чаще всего 1—3 дня. У многих лошадей температура остается нормальной. Возможны также кратковременные подъемы температуры без других видимых признаков болезни. В тяжелых случаях развиваются пневмония, поражение желудочно-кишечного тракта и нарушение сердечной деятельности.

Лабораторные методы диагностики гриппа складываются в основном из выделения возбудителя, обнаружения антител к вирусу в крови переболевших лошадей и проведения некоторых других методов исследования.

Материалом для выделения вируса гриппа служат истечения из носовой полости больных лошадей, которые следует собирать в первые дни болезни (1—2-й день), а также кусочки легкого и соскобы со слизистой трахеи павших животных.

Чтобы получить слизь, можно делать смывы из носовой полости. Для этого носовую полость орошают стерильным раствором Хенкса или мясопептонным бульоном (20—50 мл). Вытекающую жидкость собирают при помощи воронки во флаконы. Слизь можно извлекать из носовой полости тампоном, сделанным из стерильной ваты. Тампоном протирают носовые раковины и помещают его в пенициллиновые флаконы или пробирки с резиновыми пробками. Чтобы тампоны не высыхали, во флаконы предварительно наливают раствор Хенкса или физиологический раствор по 3—4 мл.

В лабораторию материал доставляется в термосе со льдом.

Кусочки легких (по 3—5 г), взятые от павших лошадей, помещают в стерильные флаконы и доставляют в лабораторию также в термосе со льдом.

Полученный материал используют для заражения куриных эмбрионов. Для этого тампоны со слизью отжимают, а из кусочков легких готовят суспензию 1:10 на растворе Хенкса или мясопептонном бульоне. Добавляют антибиотики — пенициллин и стрептомицин по 500 ЕД/мл и центрифугируют 30 минут при 3000 об/мин. Надоеадочную жидкость в дозе 0,1—0,2 мл вводят в амниотическую или аллантоисную полость 9—10-суточных эмбрионов. Для проверки каждого материала используют по 4—5 эмбрионов. Их инкубируют при 34—35° в течение 48—72 часов. Затем зародыши охлаждают при 4,—6° 2—3 часа, вскрывают и собирают аллантоисную и амниотическую жидкость. После центрифугирования жидкость проверяют на присутствие вируса гриппа в реакции гемагглютинации с эритроцитами кур. Положительная реакция гемагглютинации свидетельствует о присутствии вируса гриппа. Для окончательного установления специфичности гемагглютинации необходимо поставить реакцию торможения гемагглютинации с гипериммунными сыворотками против вируса гриппа лошадей первого и второго типа. Следует иметь в виду, что в последние годы циркулирует только вирус гриппа A/Equi 2. Вирус первого типа не выделяется.

Иногда положительная реакция с эмбриональной жидкостью бывает неспецифичной и вызывается присутствующим в жидкости яичным белком. Если реакция гемагглютинации вызвана вирусом гриппа, то при последующих пассажах на эмбрионах титр гемагглютининов повышается.

Если в жидкости эмбрионов отсутствуют гемагглютинины, необходимо провести 3—4 последовательных слепых пассажа. Для этого опять заражают куриные эмбрионы эмбриональной жидкостью предыдущего пассажа. При выделении вируса гриппа лошадей автор проводил не менее 2—4 пассажей. Как правило, гемагглютинины обнаруживаются не ранее 2—3-го пассажа.

Первоначально реакция агглютинации может быть положительной только с цельной жидкостью или разведенной 1 : 2—1 : 4. В последующих пассажах титр гемагглютининов увеличивается до 1:512, 1:1024. Исследование считают отрицательным, если гемагглютинация отсутствует после 3—4-го пассажа.

Идентификацию выделенных вирусов проводят в реакции задержки гемагглютинации с типоспецифическими сыворотками.

Сыворотки готовят путем иммунизации лабораторных животных (кролики, морские свинки и др.) вирусом гриппа лошадей первого или второго типа.

Перед постановкой реакции определяют одну гемагглютинирующую единицу вируса. Реакцию ставят с четырьмя гемагглютинирующими единицами. Иммунные сыворотки против обоих типов вируса разводят с коэффициентом 2 от 1 : 10 до их рабочего титра в объеме по 0,2 мл. Затем добавляют к каждому разведению по 4 гемагглютинирующие единицы вируса в равном объеме. После часового контакта при комнатной температуре добавляют 1%-ную взвесь куриных эритроцитов по 0,4 мл. Реакцию учитывают в течение часа. Ее удобно ставить на плексиглазовых досках.

Наиболее доступным методом диагностики гриппа считается диагностика по изменению титра специфических антител у переболевших лошадей. В основе метода лежит принцип увеличения количества антител в сыворотке переболевших животных, взятой с интервалом в 10—30 дней. Если количество антител увеличивается в 4 раза и более, это свидетельствует о переболевании лошадей гриппом. Для проведения исследования необходимо от каждой лошади брать две Пробы сывороток: первую — в начале болезни, вторую — в период выздоровления. Обе сыворотки исследуют одновременно в реакции торможения гемагглютинации.

Следует иметь в виду, что в исследуемых сыворотках могут присутствовать неспецифические ингибиторы, которые имитируют вирусингибирующее действие антител. Для освобождения от неспецифических ингибиторов (термолабильных) сыворотки прогревают при 58—59° в течение 30 минут. Термостабильные ингибиторы разрушают фильтратом холерного вибриона, перйодатом калия или другими средствами. Для обработки сыворотки перйодатом готовят 0,05 М раствор KJO4. Берут 1,15 г KJO4 растворяют при 70° в 100 мл дистиллированной воды. Раствор в равном объеме добавляют к сыворотке. Смесь оставляют на 2 часа, после чего, в нее добавляют 2 объема 5%-ного раствора глюкозы для нейтрализации перйодата. Сыворотка оказывается разведенной в 4 раза (модификация Стахановой). Для диагностики гриппа, кроме того, применяют иммунолюминесценцию, РСК и некоторые другие методы.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: