При исследовании сывороток крови животных необходимо иметь в виду, что они могут содержать:
1) агглютинины к эритроцитам животных различных видов. Содержание их у разных животных различно. Из исследуемых сывороток их удаляют. Для этого сыворотки предварительно обрабатывают эритроцитами животных того вида, которых будут использовать в реакции. Так, при исследовании сывороток на наличие антител к вирусу ПГ-3 крупного рогатого скота в РТГА используют эритроциты морской свинки, сыворотки предварительно обрабатывают эритроцитами морской свинки (на 5 мл сыворотки 2—3 капли осадка эритроцитов, 20 мин встряхивают при 4 °С и центрифугируют, надосадочную сыворотку используют в реакции). При арбовирусных инфекциях в РТГА используют гусиные эритроциты, сыворотки предварительно обрабатывают гусиными эритроцитами;
2) неспецифические ингибиторы вирусов. Как и антитела, они являются гуморальным неспецифическим фактором иммунитета и нейтрализуют инфекционную и гемагглютинирующую активности вирусов. Свое действие на вирусы неспецифические ингибиторы проявляют не только в организме (in vivo), но и в пробирке (in vitro). Наличие этих ингибиторов в исследуемой сыворотке приведет к искажению результатов серологических реакций. Поэтому все исследуемые сыворотки перед реакцией предварительно освобождают от неспецифических ингибиторов различными методами. Ингибиторы можно разделить на две группы:
а) термолябильные (β-ингибиторы), которые удаляют путем прогревания сывороток в течение 30 мин при температуре 56— 63 °С (в зависимости от вида животного, от которого получена сыворотка). Перед прогреванием сыворотки разводят не менее чем в 2 раза физиологическим раствором во избежание их свертывания;
б) термостабильные (α-, γ-ингибиторы). Одни из них выдерживают нагревание до 75 °С, другие — до 100 °С. Методы освобождения от них разные и зависят от вида животного, от которого получена сыворотка, и от вируса, используемого в реакции. Наиболее широко в диагностических лабораториях используют следующие методы:
удаление ингибиторов углекислым газом (CO2). Для этой цели чаще используют аппарат Киппа. Углекислый газ пропускают в течение 5—7 мин через исследуемую сыворотку, разведенную 1:10 дистиллированной водой, затем центрифугируют 10 мин при 1500 мин-1 (об/мин) и затем к 0,9 мл надосадочной жидкости добавляют 0,1 мл 8,5%-ного раствора NaCl, прогревают 30 мин при 56 °С и используют сыворотку в реакции;
удаление ингибиторов перйодатом калия (KIO4). С этой целью к 1 части сыворотки добавляют 1 часть 1%-ного KIO4, выдерживают 2 ч при комнатной температуре, затем добавляют 2 объема 5%-ного раствора глюкозы и 2 объема физиологического раствора (разведение сыворотки 1 : 10);
удаление ингибиторов каолином. Для этого к 1 части сыворотки добавляют 1 часть 25%-ной взвеси каолина в физиологическом растворе, полученную смесь встряхивают, оставляют на 20 мин при комнатной температуре, затем центрифугируют (10 мин при 2000 мин-1). Надосадочнуто жидкость используют в реакции (разведение сыворотки 1:2);
существуют и другие методы (обработка сыворотки различными ферментами);
3) при постановке РСК необходимо учитывать, что сыворотки могут обладать антикомплементарной активностью, т. е. способностью связывать или разрушать комплемент и, следовательно, препятствовать гемолизу эритроцитов в индикаторной системе. Антикомплементарность может быть обусловлена: индивидуальными особенностями животного; наличием в сыворотке антикоагулянтов, консервантов, бактерий, а также длительным хранением сывороток. Существуют несколько методов устранения антикомплементарности, но чаще всего используют метод обработки сывороток комплементом морской свинки. К 3 частям сыворотки добавляют 1 часть комплемента, оставляют при 4 °С на ночь, затем сыворотку прогревают 30 мин при 37 °С, разводят сыворотку физиологическим раствором 1 : 8 и прогревают 30 мин при 60 °С.