Факультет

Студентам

Посетителям

Методы серологической диагностики бактерий

Некоторые фитопатогенпые бактерии можно определять серологически.

Для этого разработано множество методов, но ниже описаны только два наиболее часто употребляемых. Оба метода основаны на специфической реакции антиген — антитела, причем исследуемые бактерии играют роль антигена. Антисыворотку получают от соответствующих учреждений или готовят в лаборатории.

Реакция агглютинации. Наиболее широко распространена методика, основанная на реакции агглютинации. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю слаборазбавленной суспензии определяемого микроорганизма и смешивают с каплей диагностической антисыворотки. Контролем служит смесь той же суспензии с нормальной сывороткой. Смешанные капли инкубируют 1—2 ч при 24 °С или (в зависимости от вида диагностируемой бактерии) при 30—37 °С, затем результаты определяют под стереомикроскопом. При положительной реакции в капле смеси образуются хлопья, при отрицательной видно равномерное помутнение.

Смесь бактериальной суспензии с нормальной сывороткой не должна давать хлопьев; если они появились, анализ необходимо повторить.

Реакция преципитации. При реакции преципитации в качестве антигена действуют не целые бактериальные клетки, а только содержащиеся в них белки. Эту реакцию можно воспроизвести после соответствующей обработки клеток различными способами, например в пробирке или в агаре.

Методика постановки реакции в агаре сводится к следующему 1% размолотого агара разводят калий-фосфатным буфером и добавляют 0,02% азида натрия. Горячий агар фильтруют через вату и по 15 мл разливают в чашки Петри диаметром 9 см. После застывания агара с помощью пробочного сверла диаметром 6 мм в каждой чашке вырезают по 5—6 лунок, располагая их крестообразно вокруг центральной лунки. Рекомендуется пользоваться при этом шаблоном, подкладывая его под каждую чашку. Расстояние между боковыми лунками и центральной должно составлять около 3 мм. В центральную лунку вносят антисыворотку, в периферические — подготовленные тест-препараты (антиген). Чтобы получить реакцию тест-организма с антисывороткой, в принципе достаточно одной пары лунок. Вместо них в агаре можно вырезать две бороздки и заполнить антисывороткой или суспензией обработанных бактериальных клеток.

Простейшая обработка бактериальных клеток, необходимая для приготовления тест-препаратов, состоит в добавлении капли насыщенного раствора фенола к 1 мл концентрированной суспензии бактерий (около 109 клеток/мл). Затем суспензию сильно продувают и вносят в лунки, предназначенные для антигена. Контролем служат лунки с нормальной сывороткой.

При положительной реакции через 24—48 ч между лунками с антисыворотками и соответствующими антигенами появляются узкие белые линии преципитации, хорошо видные при боковом освещении на темном фоне.

Если такая же линия появляется в контроле, нужно повторить опыт или изменить методику обработки бактерий.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: