Факультет

Студентам

Посетителям

Методические указания по диагностике ожога плодовых культур

Erwinia amylowora (BuriH) Winslow et al.

Бактериальный ожог считается одним из наиболее опасных заболеваний плодовых культур. Болезнь вызывается бактерией Erwinia amylowora и поражает как культурные, так и дикорастущие растения семейства розоцветных.

Возбудитель заболевания — бактерия Erwinia amylowora. Это подвижные перитрихиальные палочки, размером 0,7—0,1 х 0,9—0,5 мкм, спор и капсул не образуют; расположены одиночно, парами и короткими цепочками, грамотрицательные, некислотоустойчивые, аэробы или факультативные анаэробы.

На мясо-пептонном агаре колонии круглые, маленькие, с ровными краями, иногда опалесцирующие, маслянистой консистенции. На мясо-пептонном бульоне образуют небольшую зернистую пленку, при этом бульон мутнеет.

Из пригодного для анализа образца, предварительно промытого водопроводной и стерильной водой, вырезают кусочек на границе больной и здоровой тканей. Его помещают в стерильную воду, тщательно растирают в ступке, и мацерат наносят на поверхность питательной среды (картофельно-глюкозный или мясо-пептонный агар) в чашки Петри, которые ставят в термостат при t 28—30°С. Через 48 часов инкубации проверяют рост бактерии и колонии, похожие на Erwinia amylowora, переносят в пробирки со скошенной средой Кинга (состав среды: 1 литр дистиллированной воды, 20 г пептона, 15 г мытого долгунцового агар-агара, 10 мл глицерина, 1,5 г КН2РO4 и 1,5 г MgSO4.7H2O. Все это стерилизуют при давлении 1,5 атм в течение 20 минут). Если штамм окрашивает среду Кинга в флюоресцирующий зеленый цвет, то он относится к роду Pseudomonas. Бактерия рода Erwinia такого флюоресцирующего пигмента на этой среде не образует.

Для распознавания грамположительных и грамотрицательных бактерий используют быстрый метод Рью, где реагентом служит 3%-ный раствор КОН, который наносится на предметное стекло в количестве 1—2 капель. Одну петлю исследуемой культуры вносят в каплю щелочи и растирают, наблюдая за ее вязкостью. Если культура становится вязкой и тянется за петлей на расстояние 1,5—2 см и более, то испытываемая культура грамотрицательная. Грамположительные культуры не дают вязких образований и за петлей не тянутся.

Проверяют патогенность штаммов на молодых незрелых плодах груши по методу Уайта. Этот тест является одним из основных при определении возбудителя ожога. Суспензию бактерий (концентрация 10 клеток/мл) сначала наносят на плод груши, а затем в этом месте его три раза прокалывают энтомологической булавкой под кожицу на разную глубину. Операцию повторяют несколько раз. Затем накапывают бактериальную суспензию и помещают во влажную камеру (для этой цели используют закрытые кристаллизаторы со стерильной ватной подстилкой). Контроль — уколы на отдельной груше со стерильной водой. Если через двое суток на месте укола появляются некротические пятна и выделяется молочно-белый экссудат, то считают, что выделенные бактерии являются Erwinia amylowora, флюоресцирующие бактерии — Pseudomonas syringae (вызывают некроз ткани груши без выделения экссудата). Груши собирают незрелыми и хранят в холодильнике в течение 3—6 месяцев.

С выделенными бактериями проводят микроскопическую реакцию агглютинации на стекле с антисывороткой, полученной от кролика при введении ему чистой культуры Erwinia amylowora. Для контроля самоагглютинации берут нормальную сыворотку от неиммунизированного животного.

При положительной реакции агглютинации с выделенными бактериями идентичность их Erwinia amylowora бесспорна.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: