Свежеоплодотворенные и неоплодотворенные яйца кролика, извлеченные из фаллопиевой трубы вскоре после овуляции, окружены слизистым веществом, которое содержит много зернистых фолликулярных клеток и образует яйценосный бугорок.
Каждое яйцо окружено также лучистым венцом, состоящим из нескольких слоев фолликулярных клеток, плотно прилегающих к прозрачной оболочке (zona pellucida). При культивировании in vitro яйца начинают дробиться и фолликулярные клетки яйценосного бугорка и лучистого венца дают бурный рост. Яйца, быстро охлажденные в пробирках с сывороткой до —79°, не дробились при культивировании, однако некоторые клетки лучистого венца и яйценосного бугорка выжили и стали развиваться. Быстрое замораживание в жидком воздухе убивало все клетки. При медленном замораживании в сыворотке до —79° и последующем культивировании яйца дегенерировали, но большое число окружающих их фолликулярных клеток сохранило жизнеспособность и развивалось.
Кусочки яйценосного бугорка отделяли от яиц и замораживали отдельно в различных средах и с разной скоростью, после чего культивировали на предметных стеклах с тем, чтобы иметь возможность подсчитать процент живых и мертвых клеток. Полученные результаты показали, что 25—50% клеток переживали медленное охлаждение до —79° либо в сыворотке, либо в 0,85-процентном растворе хлористого натрия, содержащем 15% глицерина. Выживаемость была выше, когда яйценосные бугорки взвешивали в сыворотке с добавлением 15% глицерина. После инкубации в течение 4 час можно было наблюдать рост примерно 75% клеток, а затем и их дробление. Через 24 час культуры яйценосных бугорков, медленно охлажденных либо в чистой сыворотке, либо в сыворотке, содержавшей глицерин, почти не отличались от незамораживавшихся контрольных. При быстром охлаждении до —79° в культуре иногда попадались живые клетки, но при быстром охлаждении в жидком воздухе все клетки погибали. Подобные же результаты были получены и на клетках, соскобленных или выдавленных из неразорвавшихся фолликулов, при охлаждении до —79° в присутствии глицерина или без него. Все эти данные позволяют говорить о возможности хранения при очень низких температурах целых яичников; они побудили нас провести исследование по пересадке замороженной овариальной ткани.
Клетки передней доли гипофиза взрослых кроликов и крыс хорошо росли во вращающихся пробирках, а на специальной среде давали интенсивный рост специфических эпителиальных клеток. Кусочки передней доли гипофиза переживали постепенное добавление, а затем удаление глицерина, причем слои эпителиальных клеток в таких условиях пролиферировали так же, как и в незамороженных контрольных препаратах. Обработанную глицерином, медленно охлажденную до —79° ткань гипофиза оттаивали через несколько часов или дней, удаляли из нее глицерин и культивировали. Приблизительно через два дня начиналась миграция живых клеток из эксплантатов, клетки хорошо размножались и культуры по виду ничем не отличались от контрольных. В настоящее время вряд ли имеются большие перспективы в отношении успешной имплантации гипофизарной ткани в какое-либо иное место, помимо ямки турецкого седла. Поэтому лучшим способом проверки жизнеспособности замороженной ткани гипофиза является ее культивирование. Однако маловероятно, чтобы при посеве эндокринные ткани продолжали выделять свои специфические гормоны. Способность замороженной ткани гипофиза продолжать секрецию еще не исследовалась.