Обследование лесонасаждений
Для определения зараженности лесонасаждений хвойных пород нематодами рода Bursaphelenchus исследуют как погибшие деревья, так и деревья на всех стадиях усыхания. Пробы древесины берут со стволовой части, на значительном расстоянии от комля и усыхающие ветки 1-2-го порядков. Особый интерес представляют участки древесины с ходами жуков рода Monochamus и ветки со следами их дополнительного питания. Из стволовой части и веток выпиливают участки древесины толщиной 2—5 см или вырубают топором кусок древесины размером приблизительно 10 х 10 см.
При взятии проб буром содержимое помещается в бумажный конверт. На взятом куске древесины (или пакетике с керном) ставят пометку (номер или краткую информацию), а в рабочем журнале делают запись о взятии пробы на нематод.
Следует отметить, что чем больше объем куска древесины, тем больше вероятность сохранения в нем живых нематод. Обследованию на зараженность нематодами подлежат опилки, стружки, доски и другие лесоматериалы. Обследуются также сортименты, находящиеся на нижних и верхних складах лесоматериалов, а также поваленные деревья и порубочные остатки в лесонасаждениях. По этим же деревьям определяется видовой состав стволовых вредителей.
Анализ деревьев, поваленных или срубленных в текущем году, проводится в июле-августе, когда произошла откладка яиц усачами, а анализ деревьев, поваленных или срубленных в прошлом году, можно проводить в течение всего вегетационного периода.
Помимо исследования древесины на нематод возможно обследование жуков усачей рода Monochamus. Сбор насекомых проводится традиционными методами, принятыми в энтомологии. Нематоды из насекомых также выделяются методом Бермана. Перед тем как положить их на сито в воронку, жуков необходимо препарировать скальпелем или разрезать на кусочки ножницами.
В случае обнаружения нематод рода Bursaphelenchus, материал с нематодами отправляется на подтверждение во ВНИИКР. Пробы транспортируют в бумажных или пластмассовых пакетах, или в небольших контейнерах.
В случае обнаружения насаждения, в котором имеются усыхающие деревья с признаками поражения сосновой древесной нематодой, необходимо равномерно по площади отобрать 10 модельных деревьев с наиболее типичными признаками. Деревья необходимо повалить и в первую очередь оценить наличие признаков поражения их вредителями или возбудителями болезней лесных пород. Обследование проводится с привлечением инженера-лесопатолога и специалистов из местной службы защиты леса. После оценки всех возможных факторов, приведших к усыханию деревьев, отбираются пробы с поваленных деревьев, из срединной и вершинной части ствола. Далее в лабораторных условиях следует произвести выделение и определение нематод по описанной методике.
В случае нахождения нематоды Bursaphelenchus xylophilus и подтверждения диагностики специалистами ВНИИКР на район ее обнаружения накладывается карантин. Извещаются карантинные инспекции регионов, в которые произведена отправка лесоматериалов в текущем году; отправка лесоматериалов из района допускается только после окорки, а также сушки по методу Kiln-drying или фумигации.
В регионах, куда поступили лесоматериалы из зараженного района, карантинные инспекции должны отследить все поступившие оттуда лесоматериалы, отобрать из них древесные пробы и, в случае обнаружения нематоды Bursaphelenchus xylophilus, подвергнуть эти лесоматериалы уничтожению либо обработке методом тепловой сушки (Kiln-drying) или фумигации. Кроме того, необходимо проверить на сосновую древесную нематоду находящиеся рядом хвойные насаждения и склады лесоматериалов.
Для проведения обследований как в районе первичного обнаружения В. xylophilus, так и в районах, куда могла поступить зараженная лесопродукция, необходимо вызвать сотрудников отделов лесного карантина ВНИИКР и карантинного фитосанитарного контроля лесных ресурсов Росгоскарантина.
Обследование лесоматериалов на складах и в портах
При обследовании пиломатериалов (штабелей досок, поддонов, упаковочных ящиков) на нематод рода Bursaphelenchus на складах и портах отбираются пробы 10x5x5 см в местах, содержащих личиночные ходы стволовых вредителей или же имеющих признаки поражения деревоокрашивающими грибами (синева древесины и проч.). Особое внимание следует обратить внимание на наличие ходов, оставленных жуками-усачами рода Monochamus: летные отверстия, ходы личинок. Это крупные отверстия диаметром более 3 мм. Взятие древесных проб, в которых имеются ходы жуков рода Monochamus, существенно увеличивает вероятность нахождения нематод в этих образцах, т. к. нематоды, переносясь жуками, концентрируются в большей степени вокруг ходов усачей.
Если на упаковочном материале встречаются ходы насекомых или следы деревоокрашивающих грибов, необходимо отобрать по одной пробе от каждой 10-й единицы партии (поддона, коробки, и проч.).
В случае полного отсутствия признаков поражения древесины насекомыми или грибами достаточно отобрать 2—3 пробы от всей партии, выбирая самые низкокачественные участки древесной поверхности.
Для досмотра отбираются древесные пробы, в первую очередь, с участков ствола, имеющих признаки поражения усачами и деревоокрашивающими грибами.
Пробы отбираются из каждого 5-го бревна при партии до 50 бревен и из каждого 10-го при большей партии. Если лесоматериалы представлены пиломатериалами в упаковке, то пробы берутся от каждого пакета.
Лесоматериалы и тара, подвергшиеся термообработке или фумигации, не обследуются на зараженность нематодами Bursaphelenchus spp.
Методы выделения нематод
Взятые древесные пробы измельчают топором на щепу, которую затем разрезают секатором на мелкие кусочки.
Перед выделением нематод кусочки древесины взвешивают с целью дальнейшего пересчета выделенных нематод в 1 г. Выделение нематод проводится методом Бермана.
Из свежих пиломатериалов нематоды могут выделяться сразу. Если исследуются поддоны, доски упаковочных ящиков, то целесообразно инкубировать такую древесину в термостате, т. к. нематод в такой высохшей древесине мало и находятся они в 3-й устойчивой личиночной стадии. В связи с этим необходимо их размножить. Для этого мелкие кусочки древесины, разрезанные секатором, кладут в контейнер с герметично закрывающейся крышкой, который помещают в термостат при температуре 25-26°С на 6 дней. Кусочки древесины необходимо немного смочить водой. Далее нематод из древесины выделяют по методу Бермана.
Метод Бермана
На горло воронки надевают резиновую трубку соответствующего диаметра длиной 4-5 см. В другой конец трубки вставляют небольшую пробирку. В воронку помещают металлическое сито и марлю для того, чтобы кусочки ткани не тонули и не забивали отверстие воронки. Далее следует смочить сетку водой, чтобы под ней в дальнейшем не образовался воздушный пузырь, и поместить на нее расщепленные и измельченные секатором кусочки древесины. Воронку заполняют водой до уровня несколько выше сетки. Время экспозиции тканей в воде — 12 часов при комнатной температуре.
Хранение нематод возможно двумя способами: в фиксированном виде или в живом (в культуре).