Инокуляция исходного материала (кругляков, пней или отходов древесины) может осуществляться при помощи спор, мицелия или кусочков зараженной грибом древесины.
Споры гриба обычно получают из свежесобранных зрелых плодовых тел. Карпофоры гриба размельчают, помещая их в воду, и тщательно перемешивают. Водная суспензия спор используется для инокуляции древесины. Для проникновения спор в более глубокие слои древесины на кругляках и пнях делают насечки топором или просверливают отверстия диаметром 2—3 см на глубину до 5 см. Как показали наши исследования, этот метод инокуляции древесины не во всех случаях давал положительные результаты. На успешность прорастания спор и развития мицелия оказывают большое влияние влажность субстрата, условия освещенности и другие экологические факторы. При этом следует отметить, что в начальный период мицелий гриба слабо распространяется в древесине и только спустя несколько месяцев происходит его интенсивное развитие.
Более хорошие результаты были получены при инокуляции пней и древесных отрубков кусочками древесины, полуразрушенной опенком летним. Грибники-любители такие образцы могут легко заготовить из древесины пней, на которых наблюдается образование плодовых тел гриба. При этом следует обращать внимание на то, чтобы образцы были выколоты из зоны активного роста мицелия. Заготовленные образцы инокулированной древесины помещают в затески или в отверстия, после чего поверхность древесины покрывают мхом или землей. В отдельных случаях образцы инокулированной древесины можно прикреплять к верхней поверхности пней и круглых лесоматериалов при помощи гвоздей. При этом обеспечивается более тесный контакт и более быстрое развитие мицелия в исходном материале. При наличии специализированной микологической лаборатории возможно централизованное приготовление образцов инокулированной древесины. При этом образцы древесины определенных размеров (чаще в виде тонких дощечек) искусственно инокулируют чистой культурой наиболее продуктивных штаммов опенка летнего. Опыт культивирования опенка летнего на древесине в ГДР показал, что лучше всего инокуляцию древесины производить предварительно выращенной культурой гриба на различных питательных средах. В качестве одного из основных компонентов среды В. Лутхардт рекомендует использовать древесину, пронизанную грибным мицелием, в виде мелкой стружки. Для лучшего роста мицелия гриба к стружкам из древесины добавляют воду, солод и пептон. Мицелий, выращенный на такой смеси, получил название прививочной пасты. Такая паста готовится в специальных 2-литровых цилиндрических стаканах.
Нами были проведены исследования по выбору оптимального состава прививочной пасты, которые показали, что для приготовления пасты лучше использовать березовые опилки или мелкую стружку, хорошо смоченную водой. В качестве дополнительных питательных веществ можно брать пептон, овсяную муку, картофельную мезгу, клюквенный порошок или мелконарезанные корнеплоды свеклы. На березовых опилках с пептоном или овсяной мукой наблюдался довольно хороший рост мицелия, который вначале был беловатого цвета, впоследствии приобретал светло-коричневый оттенок. Более интенсивный рост мицелия гриба происходил, когда к березовым опилкам добавляли картофельную мезгу, мелконарезанные кусочки корнеплодов свеклы или клюквенный порошок, представляющий отход производства. Мицелий довольно быстро покрывал поверхность среды и проникал в глубь субстрата. Он имел светло-бежевый или кремовый цвет. Примерно за месяц мицелий пронизывает полностью субстрат и паста готова к употреблению. Дальнейшее выдерживание прививочного материала в помещении может привести к его подсыханию и образованию большого количества мелких плодовых тел, что вызывает истощение мицелия и падение его активности. Поэтому прививочную пасту желательно использовать до начала образования плодовых тел. Процесс плодоношения гриба может быть замедлен, если прививочную пасту выдерживают при температуре от 0 до 4° С. В таких условиях мицелий гриба сохраняет активность в течение нескольких месяцев. Процесс приготовления прививочного материала заключается в следующем:
В чашках Петри в конических колбах на 250 мл на агаризованном пивном сусле выращивают чистую культуру опенка летнего. Этот мицелий служит исходным материалом для выращивания маточной культуры (субмерсионного раствора), применяемой для инокуляции прививочной пасты. Конические колбы объемом 1 л заливают 6%-ным пивным суслом и подвергают дробной стерилизации. После охлаждения их инокулируют мицелием, взятым из внешней зоны прироста чашек Петри. Колбы устанавливают на биологическую качалку и мицелий выращивают в жидкой культуре в течение 10 дней. За это время в растворе формируется большое количество мелких шариков мицелия.
Одновременно готовят материал для прививочной пасты. Для этой цели древесные опилки и стружку (желательно березовые) очищают от кусочков коры и других примесей. Их загружают в цилиндрические стеклянные банки и дополнительно смачивают водой и питательными веществами. После стерилизации приготовленных смесей их инокулируют маточной культурой гриба, путем ее заливки в стеклянные банки. Банки выдерживают в комнате при температуре 15—20° С в условиях рассеянного освещения. Активность прививочного материала зависит от влажности пасты и температуры помещения. Появление зачатков плодовых тел на пасте указывает, что дальнейшееее хранение нецелесообразно, и она должна быть по возможности в короткий срок использована для инокуляции древесного материала. Паста, на которой наблюдается развитие посторонних микроорганизмов, не рекомендуется для употребления.
Транспортировка готового прививочного материала на объекты работы может производиться в эмалированных ведрах с крышкой. Желательно, чтобы прививочная паста в ведрах долго не хранилась и была использована в течение 3—5 дней. При работе с прививочной пастой необходимо соблюдать определенные меры предосторожности (стерильности), чтобы на ней по возможности не появлялась плесень или другие вредные для культивируемого гриба микроорганизмы.