Факультет

Студентам

Посетителям

Ракетный и двумерный (перекрестный) иммуноэлектрофорез

Ракетный иммуноэлектрофорез (РИЭФ) и двумерный иммуноэлектрофорез (ЦИЭФ) в отличие от ВИЭФ — количественные методы. Они основаны на электрофорезе антигенов в агаре, содержащем антитела (Laurell, 1965).

РИЭФ позволяет определить, сколько антигена содержится в штамме или ином объекте исследования. Если в материале имеется антиген, то образуется «ракетка», если нет — она отсутствует. РИЭФ по чувствительности несколько уступает РИГА, но очень демонстративен.

ДИЭФ дает возможность определить весь набор антигенов; их может быть несколько десятков (20…30 и больше). Для изучения антител количественные методы используются реже.

РИЭФ. Проводят ИЭФ антигена в 1%-м агаре «Серва» на мединал-вероналовом буфере с лактатом кальция. К 25 мл охлажденного до 48 °С агара добавляют 1,5 мл моноспецифической сыворотки. Раствор выливают на стеклянную пластину 120 х 90 мм и после застывания с катодной стороны пробивают ряд лунок диаметром 2 мм на расстоянии 1 см друг от друга. В лунки вносят 10 мкл антигена (контроль) и водно-солевой экстракт клеток, в которых необходимо определить его содержание (опыт).

Электрофорез проводят при напряжении 5 В/см и силе тока 35 мА в течение 2 ч. В положительном случае образуются ракетки.

ДИЭФ. Техника выполнения заключается в следующем. На пластинку наносят 25 мл 1%-го расплавленного агара. На расстоянии 1 см от катодной стороны пробивают лунки диаметром 5 мм и вносят в них по 20 мкл исследуемого материала.

Электрофорез в первом направлении проводят при напряженности 5 В/см и силе тока 30 мА в течение 2 ч. Затем гель разрезают на полоски и переносят на другие пластинки, оставшуюся часть пластинки заливают агаром, содержащим соответствующую сыворотку.

Электрофорез во втором перпендикулярном направлении проводят при напряженности 1,2 В/см и силе тока 20 мА. Для приготовления геля используют трис-веронал-глициновый буфер Свенсена ионной силой 0,02.

Результаты РИЭФ очень демонстративные при изучении штаммов Y. pestis, не синтезирующих антигены Ф1 и Т. Была использована антифракционная чумная сыворотка 231 (708). Эти штаммы ракеток не образуют. Определено количественное содержание Ф1 и Т в водно-солевых экстрактах клеток штамма Y. pestis 231 и его вариантах.

Наибольшее количество зон преципитата в ДИЭФ со штаммами 14-37 Y pestis наблюдается с гипериммунными сыворотками лошадей. В ДИЭФ возможно идентифицировать иерсинии чумы по содержанию антигенов Ф1 и Т.

Таким образом, количественные методы ИЭФ позволяют идентифицировать Y. pestis и определить набор антигенов. Их следует применять в первую очередь для глубокого изучения антигенной структуры патогенных микроорганизмов.

При использовании ДИЭФ с возбудителями сапа и мелиоидоза были идентифицированы общие и индивидуальные антигены клеточных структур, определено место антигенов клеточных структур в общем антигенном составе мелиоидозного микроба (антигены цитоплазмы, клеточных стенок и пр.). Всего в ДИЭФ у В. pseudomallei выявлено 22 антигена, у В. mallei — 21, причем 11 были общими.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: