По окончании инкубационного периода образец можно исследовать на присутствие болезнетворных организмов, вредителей и на физиологические расстройства и определить их вредоносность для семян.
Наиболее удобным и эффективным методом испытания семян с этой целью является проращивание на промокательной бумаге. Семена раскладывают без предварительной обработки на таком расстоянии друг от друга, чтобы развивающиеся проростки не соприкасались между собой. Влажность и температуру нормируют в соответствии с требованиями патогенов и семян-хозяев, причем эти условия часто совпадают с теми, которые применяются при определении всхожести. Поскольку у многих грибов овет, особенно прерывистое «ближнее» ультрафиолетовое излучение, стимулирует спорообразование, при испытании рекомендуется чередовать 12-часовые светлые и темные циклы. Некоторые виды грибов требуют для своего развития специальных условий: так, например Helminthosporium victoriae на овсе требует относительно высокой температуры (28°); Septoria tiodorit на некоторых сортах пшеницы вызывает появление вздутий на колеоптилях проростков, особенно в тех случаях, когда влажность обеспечивает только прорастание, а симптомы поражения пшеницы Fusarium легче распознаются, если инкубация протекает в темноте. Хотя присутствие некоторых организмов можно определить невооруженным глазом, тем не менее для более точного определения нередко требуется стереоскопический, а для определения спор — обычный микроскоп.
Семена обычно после предварительной обработки можно также помещать на агар для получения характерных колоний патогенов. Колонии определяют обычно макроскопически, но для точного определения вида требуется микроскопическое исследование.
Насекомых и такие дефекты семян, как симптомы недостаточности марганца, можно исследовать и определять после разделения семядолей или разрезания семян. Это можно делать после размягчения семян в воде или, что еще удобнее, в конце инкубационного периода.
Посев в песок или измельченный кирпич и инкубацию в течение 10—14 дней также можно расценивать, как испытание такого же типа. Никакой предварительной обработки семян не проводят, влажности субстрата поддерживают на высоком уровне, и создаваемые условия вполне допускают заражение Проростков паразитами.
Ниже указаны основные группы патогенных организмов или патологических состояний, которые следует учитывать в процессе испытаний с применением инкубации.
1. Патогенные грибы или бактерии, находящиеся в семенах и прорастающие из них или поражающие проростки.
2. Насекомые, в том числе их личиночные стадии, находящиеся внутри семян, и признаки, говорящие о том, что вредители могли уже вывестись из них.
3. Физиологические расстройства, о которых свидетельствуют пятна мертвой или обесцвеченной ткани в центре семядолей и (или) некротизированные почечки.
Обработанные семена можно проверять теми же методами иногда с небольшими видоизменениями.
Присутствие сапрофитных плесеней часто, хотя и не всегда, указывает на плохое качество семян, обусловленное неблагоприятными условиями уборки, обработки или хранения, а также старением. Виды быстро распространяются на семенах при испытании их на бумажных субстратах и могут вызвать загнивание первоначально здоровых проростков.
Выращивание, растений из семян и наблюдение за появлением на них симптомов заболеваний можно считать самым удобным, а часто и единственно возможным методом обнаружения бактерий, грибов или вирусов в семенах. В таких случаях можно или высевать семена из проверяемого образца, или использовать инокулюм, полученный из семян, для опытов с заражением здоровых растений. Растения можно выращивать в теплице или в поле, но их необходимо защищать от возможного внедрения патогенов извне.
Проращивание на промокательной бумаге, пропитанной 2,4-Д. Проба: 1000 семян.
Среда: листы промокательной бумаги, тщательно смоченные 0,2%-ным раствором натриевой соли 2,4-ди — хлорфен-оксиуксусной кислоты для подавления прорастания семян.
Инкубация: 6—11 дней при 18—22°С.
Просмотр на присутствие Alternaria brassicae, A. brassicicola, Phoma lingam, Rhizoctonia solani и Sclerotinia sclerotiorum: через 6 дней нужно просмотреть семена под микроскопом при увеличении 20—25 X на присутствие конидий Alternaria brassicae и A. brassicicola. Через 6 дней просмотреть на присутствие рыхлого серебристо-белого мицелия и зачатков пикнид Phoma lingam; второй учет провести через 10—11 дней, когда пикниды гриба разовьются на семенах, а нередко и на окружающей бумаге.