Факультет

Студентам

Посетителям

Микроскопическое исследование бруцелл

В СССР в настоящее время известны 4 вида бруцелл — Br. abortus, Br. melitensis, Br. suis и Br. ovis.

Микроскопически все 4 вида бруцелл между собой не различимы.

Морфологические свойства бруцелл. Морфология бруцелл несколько варьирует в зависимости от среды, в которой они культивируются (жидкая, плотная, содержащая кровь), давности пересева и других условий. Особенно часто наблюдается это с культурами Br. ovis.

Бруцеллы имеют вид мелких кокков или очень коротких палочек, похожих на овоиды. Br. melitensis имеет размер 0,4—2,2 мкм в длину и 0,4—0,8 мкм в ширину; Br. abortus — 0,4—2,5 мкм в длину и 0,4—0,6 мкм в ширину; Br. suis чаще встречается в виде палочек 0,6—3 мкм в длину и 0,2—0,8 мкм в ширину.

В мазках из патологического материала, например из содержимого сычуга абортированного плода, бруцеллы часто группируются кучками, располагаясь в одной плоскости. В таких скоплениях бруцеллы имеют вид микрококков, а клетки, лежащие отдельно в этом же мазке, — коротких палочек.

Бруцеллы спор не образуют. В особых условиях, чаще в организме животных, образуют капсулы. Хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красками и по Романовскому.

Методы окраски бруцелл. Для окраски бруцелл чаще применяют 2 способа — по Козловскому и по Граму. Также рекомендуется окраска их по Кюстеру.

Окраска по Козловскому. Метод Козловского основан на свойстве бруцелл более медленно воспринимать некоторые краски, в частности растворы сафранина, по сравнению с посторонними микроорганизмами, наиболее часто встречающимися в обследуемых материалах. По Козловскому очень показательно окрашиваются присылаемые в лабораторию мазки, приготовленные из выделений матки, плаценты, сычуга и других органов абортированного плода, плодных оболочек, гноя и др. Бруцеллы окрашиваются в красный цвет, а другие микроорганизмы — в зеленый. При исследовании выделений из матки бруцеллы могут быть обнаружены внутри лейкоцитов. Этот метод пригоден также для окраски музейных культур.

Окраску по Козловскому производят следующим образом. Нетолстый мазок из культуры или отпечаток из органов на предметном стекле высушивают на воздухе или в термостате, затем фиксируют над пламенем горелки. Покрывают 2%-ным водным раствором сафранина и подогревают при движении стекла над пламенем горелки в течение 1,5—2 мин, до появления пузырьков газа. Затем мазок промывают водой, окрашивают 0,75—1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 20—30 с, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Малахитовую зелень можно заменить 1%-ным раствором бриллиантовой зелени или метиленовой синьки.

Окраска по Граму. Приготовленные и фиксированные мазки таким же образом, как и в предыдущем случае, покрывают фильтровальной бумагой, увлажненной изотоническим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой. Наносят на 2 мин кристаллвиолет или генцианвиолет так, чтобы краска не заходила за края бумаги, и равномерно распределяют по поверхности стекла. Затем удаляют бумагу, наносят на 2 мин свежеприготовленный люголевский раствор, а по истечении указанного срока раствор смывают и на 2 мин покрывают мазок йодированным спиртом (2 мл 10%-ного спиртового раствора йода и 98 мл 96%-ного этилового спирта). После этого мазок промывают и докрашивают в течение 2 мин 1%-ным водным раствором сафранина или фуксином Циля, разведенным 1 : 10 дистиллированной водой. Затем мазок вновь промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Окраска бруцелл по Граму является одним из лучших методов.

Окраска по Кюстеру. Приготовленный тонкий мазок из материала, разведенного изотоническим раствором хлорида натрия, высушивают и фиксируют над пламенем горелки. Готовят ex tempore щелочной раствор сафранина: берут 1,5 мл нормального раствора КОН (5,6 г КОН на 100 мл дистиллированной воды) и добавляют 5 капель 3%-ного водного раствора сафранина. Красят мазок щелочным раствором сафранина в течение 1 мин и смывают водой. Затем на мазок наносят 0,05%-ный раствор серной кислоты на 15 мин (протрава). Мазок тщательно промывают водой и красят в течение 15—20 с 3 %-ным водным раствором метиленовой синьки, промывают водой и высушиваю фильтровальной бумагой. Бруцеллы окрашиваются в красный цвет, остальные микроорганизмы — в синий.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: