Факультет

Студентам

Посетителям

Методы выделения вирусов из материала больных животных и трупов

Выделение вируса из исследованного материала — самый важный этап в диагностике вирусных болезней. Его проводят на живых чувствительных к предполагаемому вирусу системах: на животных, куриных эмбрионах и культурах клеток.

Для заражения чувствительных систем из материала (кусочки органов и тканей) готовят суспензию. С этой целью материалы измельчают, растирают в ступке со стерильным кварцевым песком, разводят стерильным физиологическим раствором или раствором Хенкса (1 : 5—1 : 10), освобождают от крупных частиц путем центрифугирования в течение 20—30 мин при 2000— 3000 мин-1. Затем суспензию освобождают от бактерий и грибов, используя для этой цели антибиотики (обычно смесь пенициллина и стрептомицина по 200—1000 ЕД на 1 мл жидкости и нистатина), или пропускают через бактериальные фильтры (редко). Контролируют эффективность такой обработки посевом на питательные среды для аэробов, анаэробов и грибов. Мосле получения отрицательного результата бактериологическою контроля вируссодержащий материал используют для заражения живых объектов.

Смывы для заражения готовят следующим образом. Тампоны, погруженные в соответствующий раствор, встряхивают 10—15 мин, тщательно отжимают, полученную жидкость центрифугируют при 2000—3000 мин-1 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильные пробирки, обрабатывают антибиотиками и после бактериологического контроля используют для заражения. Из осадка клеток готовят мазки для РИФ.

Полученной таким образом суспензией заражают чувствительные к предполагаемому вирусу живые объекты (животных, куриные эмбрионы, культуры клеток) и регистрируют появление у них признаков размножения вируса, что служит показателем наличия вируса в исследуемом материале. Однако вирус не всегда проявляет действие в первом пассаже. В этом случае необходимо провести 1-4 «слепых» пассажа, чтобы вирус адаптировался к используемому живому объекту и накопился в количестве, достаточном для проявления своего действия.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: