Факультет

Студентам

Посетителям

Методы концентрирования с помощью иммуносорбентов и магносорбентов

Концентрирование микроорганизмов с помощью мембранных фильтров наряду с рядом преимуществ имеет и существенный недостаток.

Он состоит в том, что мембрана прочно адсорбирует на поверхности и в матрице до 70…90 % микробных клеток, поэтому в смыве находится только 10…30 % бактерий из пробы, что снижает результативность анализа. По этой причине лишь при концентрации возбудителя 1 ∙ 106 … 1 ∙ 107 м. т. получают стабильно положительные результаты. Концентрирование с применением иммуносорбентов (ИС) и магносорбентов (МС) лишено указанных недостатков.

Применение ИС основано на том, что полимерные гранулы сшиты со специфическими антителами к исследуемому микроорганизму. Объект внешней среды (вода, смыв) пропускают через колонку с ИС, и микроорганизм фиксируется на гранулах, которые затем исследуют бактериологически или серологически с целью его выявления.

МС отличается от иммуносорбента тем, что в состав его гранул дополнительно вводят частицы, которые обладают магнитными свойствами. Эти частицы в магнитном поле легко концентрируются вместе с фиксированными клетками микроорганизмов.

Преимущество ИС и МС в том, что они позволяют провести избирательное концентрирование быстро и эффективно. Эти сорбенты значительно повышают разрешающую способность бактериологических и серологических методов.

Для получения МС применяют различные магнитные материалы с частицами размером 0,5…300 мкм: оксид железа, ферриты, мелкие металлические частицы железа и др.

Приготовление микрогранулированного МС. Для увеличения гидрофильносги магнитные частицы перед включением в МС обрабатывают агаром или агарозой. К расплавленной агарозе добавляют магнитный порошок и охлаждают. Полученный блок размельчают и частицы отмывают. Можно полимеризировать гель в сосуде, снабженном пропеллерной мешалкой. Размер полученных гранул МС измеряют с помощью микрометрической приставки в световом микроскопе. Качество МС оценивают также по величине магнитного момента гранул, который рассчитывают по специальной формуле.

Техника применения магносорбента. Для сепарации используют стаканы, пробирки, пипетки и проточные трубки, к стенкам которых снаружи прикрепляют постоянные магниты. Гранулы МС притягиваются к местам нахождения магнитов. После удаления магнита фиксированные на стенках гранулы легко отделяются от поверхности. Малые количества МС отбирают из среды реакции большего объема с помощью устройства, представляющего собой стеклянную трубку с постоянным или электрическим магнитом. Магносорбент прикрепляют к поверхности трубки, которую затем переносят в другую емкость с жидкостью для промывания. Затем магнит выдвигают из трубки, и МС легко отделяется от поверхности.

Возможность автоклавирования стеклянной трубки после извлечения магнита позволяет использовать это устройство при работе с патогенными микроорганизмами.

В схеме изготовления МС предусматривается размагничивание частиц для предотвращения образования конгломератов. С этой целью используют прибор Р-336 для размагничивания магнитных лент.

Приготовление МС, содержащих иммуноглобулины (ИГ) для адсорбции антигенов. Магносорбент на основе ИГ иммунной сыворотки, включенных внутрь гранул, готовят по методике, описанной выше.

В качестве аффинанта используют ИГ, выделенный из сыворотки путем фракционирования сульфатом аммония с последующим обессоливанием диамидом или гель-фильтрацией на сефадексе G-25; 1 мл седиментированных гранул МС содержит 50…70 мг белка ИГ. Степень адсорбции АГ определяют в РИГА с иммуноглобулиновым эритроцитарным диагностикумом; 1 г седиментированного МС адсорбирует 10 мг антигена или бактериальных клеток возбудителя в концентрации 1 ∙ 105…1 ∙ 107 м. т. в объеме 6 мл.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.



Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: